bestbio@163.com
服务热线：021-33921235
登录
说明书下载
产品概述
product description
贝博® BBcellProbe® 基质金属蛋白酶-9（MMP-9）活性检测试剂盒（BB-49133）是采用荧光共振能量转移（FRET）机制检测MMP-9活性的试剂盒。
贝博® 设计合成的BBcellProbe® MMP-9特异性荧光底物连接荧光团和淬灭剂，在完整的底物中，底物一端的荧光基团（fluorophore）的荧光被另一端的荧光受体淬灭基团（quencher）淬灭，通过FRET效应抑制荧光。
保存温度
2-8℃ 避光
注意事项
1.微量试剂开盖前须离心！
2.开盖后组份按要求条件保存。
3.拆封后请尽快使用完！
2.开盖后组份按要求条件保存。
3.拆封后请尽快使用完！
有效期
6个月
检测方法
荧光酶标仪或荧光光度计
适用样本
细胞/组织
仪器准备
1.荧光酶标仪或荧光光度计
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液等
2.蛋白定量试剂盒
2.蛋白定量试剂盒
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
4.荧光检测专用的黑色96孔板（必备）
2.吸头
3.一次性手套
4.荧光检测专用的黑色96孔板（必备）
使用注意事项
1.除了目标模型样本，须根据实验需要合理设置阳性对照、阴性对照、空白对照等样本。
2.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体损失导致试剂量不够用。
3.底物为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
4.预实验需确定酶浓度和孵育时间的线性区间，避免底物过度消耗或信号饱和。
2.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体损失导致试剂量不够用。
3.底物为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
4.预实验需确定酶浓度和孵育时间的线性区间，避免底物过度消耗或信号饱和。
使用方法
样品处理
细胞样品
1. 收集5×106个以上的细胞，在4℃，500×g条件下离心5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
2. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3. 在细胞中加入50 μl冷的贝博裂解缓冲液，高速涡旋振荡15秒。
4. 置冰上持续振荡20-45分钟。
5. 在4℃，12,000×g条件下离心15分钟。
6. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，置于冰上立即检测或者-80℃冰箱保存备用。
组织样品
1. 取适量组织样本剪碎，预冷的 PBS 冲洗去除残留血液，无菌滤纸吸干表面液体，快速称重后剪碎。
2. 按照每50 mg/100 μl冷的贝博裂解缓冲液，用组织匀浆器/匀浆机匀浆至无明显肉眼可见组织块。
3. 冰上振荡20-45分钟，小心将上清吸入另一预冷的干净离心管。
4. 在4℃，12,000×g条件下离心5分钟。
5. 将中层上清液吸入另一预冷的干净离心管，置于冰上立即检测或-80℃冰箱保存备用。
蛋白定量
对上述处理过的上清进行蛋白定量。
酶活性计算
基质金属蛋白酶-9 活性可表示为每百万细胞的相对荧光单位（RFU）、样品中每微克蛋白质的相对荧光单位（RFU），或处理组样品相对于未处理对照组或阴性对照样品的 RFU 倍数增加。
酶活性 = F / C样本
细胞样品
1. 收集5×106个以上的细胞，在4℃，500×g条件下离心5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
2. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3. 在细胞中加入50 μl冷的贝博裂解缓冲液，高速涡旋振荡15秒。
4. 置冰上持续振荡20-45分钟。
5. 在4℃，12,000×g条件下离心15分钟。
6. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，置于冰上立即检测或者-80℃冰箱保存备用。
组织样品
1. 取适量组织样本剪碎，预冷的 PBS 冲洗去除残留血液，无菌滤纸吸干表面液体，快速称重后剪碎。
2. 按照每50 mg/100 μl冷的贝博裂解缓冲液，用组织匀浆器/匀浆机匀浆至无明显肉眼可见组织块。
3. 冰上振荡20-45分钟，小心将上清吸入另一预冷的干净离心管。
4. 在4℃，12,000×g条件下离心5分钟。
5. 将中层上清液吸入另一预冷的干净离心管，置于冰上立即检测或-80℃冰箱保存备用。
蛋白定量
对上述处理过的上清进行蛋白定量。
酶活性计算
基质金属蛋白酶-9 活性可表示为每百万细胞的相对荧光单位（RFU）、样品中每微克蛋白质的相对荧光单位（RFU），或处理组样品相对于未处理对照组或阴性对照样品的 RFU 倍数增加。
酶活性 = F / C样本
常见问题分析
荧光强度值偏低？
1. 样品上样量不够。
2. 样本不新鲜。
3. 样品裂解不够充分。
1. 样品上样量不够。
2. 样本不新鲜。
3. 样品裂解不够充分。
-
优惠促销Promotion
-
轻松下单Order
-
在线留言Online message
-
帮助中心Help center