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产品概述
product description
贝博® BBcellProbe® 组织蛋白酶L（Cathepsin L）活性检测试剂盒（Cathepsin L Activity Assay Kit）是采用荧光共振能量转移（FRET）机制检测Cathepsin L活性的试剂盒。
贝博® 设计合成的BBcellProbe® Cathepsin L特异性荧光底物连接荧光团和淬灭剂，在完整的底物中，底物一端的荧光基团（fluorophore）的荧光被另一端的荧光受体淬灭基团（quencher）淬灭，通过FRET效应抑制荧光。
保存温度
2-8℃ 避光
注意事项
1. 微量试剂开盖前须离心！
2. 开盖后组份按要求条件保存。
3. 拆封后请尽快使用完！
2. 开盖后组份按要求条件保存。
3. 拆封后请尽快使用完！
有效期
6个月
检测方法
荧光酶标仪或荧光光度计
适用样本
组织/细胞/重组酶
仪器准备
1. 荧光酶标仪/荧光分光光度计
2. 离心机
3. 移液器
4. 冰箱
5. 冰盒
2. 离心机
3. 移液器
4. 冰箱
5. 冰盒
试剂准备
1. PBS缓冲液
2. 蛋白定量试剂盒
3. DTT（二硫苏糖醇）
2. 蛋白定量试剂盒
3. DTT（二硫苏糖醇）
耗材准备
1. 离心管
2. 吸头
3. 一次性手套
4. 荧光检测专用的黑色96孔板（必备）
2. 吸头
3. 一次性手套
4. 荧光检测专用的黑色96孔板（必备）
使用注意事项
1. 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体损失导致试剂量不够用。
2. 底物为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
3. 预实验需确定酶浓度和孵育时间的线性区间，避免底物过度消耗或信号饱和。
4. 37℃下反应如果颜色变化不明显，可以适当延长反应时间。
5. 如果样品中蛋白含量低，加大样品量，裂解样品时需设法使样品中的蛋白量达到200-500 μg每样。
2. 底物为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
3. 预实验需确定酶浓度和孵育时间的线性区间，避免底物过度消耗或信号饱和。
4. 37℃下反应如果颜色变化不明显，可以适当延长反应时间。
5. 如果样品中蛋白含量低，加大样品量，裂解样品时需设法使样品中的蛋白量达到200-500 μg每样。
使用方法
样品处理
细胞样品
1. 收集细胞，离心5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
2. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3. 在细胞中加裂解缓冲液，高速涡旋振荡15秒。
4. 置冰上持续振荡20-45分钟。
5. 离心15分钟。
6. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，置于冰上立即检测或者-80℃冰箱保存备用。
详细操作见贝博试剂盒里的纸质说明书。
组织样品
1. 取适量组织样本剪碎，预冷的 PBS 冲洗去除残留血液，无菌滤纸吸干表面液体，快速称重后剪碎。
2. 按照每50 mg/100 μl冷的裂解缓冲液，用组织匀浆器/匀浆机匀浆至无明显肉眼可见组织块。
3. 冰上振荡20-45分钟，小心将上清吸入另一预冷的干净离心管。
4. 离心5分钟。
5. 将中层上清液吸入另一预冷的干净离心管，置于冰上立即检测或-80℃冰箱保存备用。
蛋白定量
对上述处理过的上清进行蛋白定量。
细胞样品
1. 收集细胞，离心5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
2. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3. 在细胞中加裂解缓冲液，高速涡旋振荡15秒。
4. 置冰上持续振荡20-45分钟。
5. 离心15分钟。
6. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，置于冰上立即检测或者-80℃冰箱保存备用。
详细操作见贝博试剂盒里的纸质说明书。
组织样品
1. 取适量组织样本剪碎，预冷的 PBS 冲洗去除残留血液，无菌滤纸吸干表面液体，快速称重后剪碎。
2. 按照每50 mg/100 μl冷的裂解缓冲液，用组织匀浆器/匀浆机匀浆至无明显肉眼可见组织块。
3. 冰上振荡20-45分钟，小心将上清吸入另一预冷的干净离心管。
4. 离心5分钟。
5. 将中层上清液吸入另一预冷的干净离心管，置于冰上立即检测或-80℃冰箱保存备用。
蛋白定量
对上述处理过的上清进行蛋白定量。
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