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产品概述
product description
贝博®BBcellProbe细胞焦亡形态学检测试剂盒是采用绿色荧光的细胞膜标记探针和红色荧光的细胞核探针检测细胞焦亡相关细胞形态、质膜破裂情况、染色质形态来观察细胞焦亡。
焦亡细胞核心形态学特征为：细胞肿胀变大、细胞膜形成10-20nm的孔道、核染色质固缩（但核膜相对完整，无核片段化、胞质内容物（如炎症因子）释放，最终细胞破裂。
两种探针荧光标记后通过共聚焦观察，能有效区分焦亡与其他细胞死亡形式。
保存温度
-20℃避光
注意事项
1.试剂拆封后请尽快使用完！
2.染料短期2周内可2-8℃保存，长期不用-20℃保存。
2.染料短期2周内可2-8℃保存，长期不用-20℃保存。
有效期
6个月
检测方法
激光共聚焦显微镜
适用样本
细胞
产品应用
荧光酶标仪/荧光显微镜/流式细胞仪
仪器准备
1.共聚焦显微镜
2.离心机
3.冰箱
4.冰盒
2.离心机
3.冰箱
4.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液
2.纯水
2.纯水
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
4.黑色透明底细胞培养本
2.吸头
3.一次性手套
4.黑色透明底细胞培养本
使用注意事项
1.预实验很重要。必须要做预实验，在正式实验之前取少量样本优化实验条件，并像正式样本一样认真进行，看实验结果是否可行，实验条件是否适合自己的样本。由于生物样本的多样性，不同样本的实验条件通常差异较大，同种细胞的不同模型下需要的实验条件也可能不同，为了避免浪费正式样本和试剂，一定要提前预实验优化实验条件。
2.设立严谨的对照：任何实验都离不开对照。除了目标模型样本，须根据实验需要合理设置阳性对照（用已知的焦亡诱导剂，如尼日利亚菌素处理的细胞）、阴性对照（未处理细胞）等样本，正确判断实验组中出现的现象是否确实源于焦亡。
3.必须联合使用多种方法：形态学检测最好能与生化指标（如WestemBlot检测GSDMD的切割、Caspase-1的活化，ELISA检测上清液中IL-1B和IL-18 的释放）相结合，从多个角度共同证实焦亡的发生，使结论更加可靠。
4.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
5.染色液极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要充分回温溶解混匀，防止在吸头内壁产生损耗。融解后离心至管底部再打开螺旋盖。
6.细胞处理需要小心操作，尽量避免人为的损伤细胞。
7.各换液、洗涤步骤需要避免丢掉状态不好的粘附性降低的细胞、漂浮细胞等。换液须使用培养板离心机操作。没有培养板离心机时，用离心管收集后加回培养孔。
2.设立严谨的对照：任何实验都离不开对照。除了目标模型样本，须根据实验需要合理设置阳性对照（用已知的焦亡诱导剂，如尼日利亚菌素处理的细胞）、阴性对照（未处理细胞）等样本，正确判断实验组中出现的现象是否确实源于焦亡。
3.必须联合使用多种方法：形态学检测最好能与生化指标（如WestemBlot检测GSDMD的切割、Caspase-1的活化，ELISA检测上清液中IL-1B和IL-18 的释放）相结合，从多个角度共同证实焦亡的发生，使结论更加可靠。
4.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
5.染色液极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要充分回温溶解混匀，防止在吸头内壁产生损耗。融解后离心至管底部再打开螺旋盖。
6.细胞处理需要小心操作，尽量避免人为的损伤细胞。
7.各换液、洗涤步骤需要避免丢掉状态不好的粘附性降低的细胞、漂浮细胞等。换液须使用培养板离心机操作。没有培养板离心机时，用离心管收集后加回培养孔。
使用方法
仅用参考，最终以试剂盒里的纸质说明书为准：
染色工作液的配制：
1. 根据样本数量，用37C培养箱预热的PBS或HBSS将BBcellProbe®MO1荧光染料
进行500-2000倍稀释，配制成染色工作液A。
2.根据样本数量，用37°C培养箱预热的PBS或HBSS将BBcellProbeN91荧光染料
进行500-2000倍稀释，配制成染色工作液B。
细胞染色：
悬浮细胞：
1． 用PBS洗涤细胞2次。
2.加入适量体积的染色工作液重悬细胞，使其密度大约为1×10的6次方/mL。
3.在37℃孵育细胞5~20分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。可以用20分钟作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。
【注】
若染色不够充分，建议增加染料浓度或延长染色时间，
4.在500×g离心5分钟。
5.倾倒上清液，再次缓慢加入37°C预热的PBS或培养基重悬细胞。
6.重复（4），（5）步骤两次以上。
贴壁细朐染色
1用PBS洗涤细胞2次。
2.细胞培养板中或细胞爬片上加入适量体积的染色工作液。
【注】
●96孔细胞培养板每孔加入100μl染色液即可。
3.37°C孵育细胞5~20分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。可以用20分钟作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。
【注】
●若染色不够充分，建议增加染料浓度或延长染色时间。
4.吸干染色工作液，用PBS或培养基洗培养板或盖玻片2~3次，每次用预热的培养基覆盖所有细胞，孵育5~10分钟，然后吸干培养基。
激光共聚焦观察：
激发波长488nm，探针A 最大发射波长为500nm，探针B最大发射波长为616nm。
染色工作液的配制：
1. 根据样本数量，用37C培养箱预热的PBS或HBSS将BBcellProbe®MO1荧光染料
进行500-2000倍稀释，配制成染色工作液A。
2.根据样本数量，用37°C培养箱预热的PBS或HBSS将BBcellProbeN91荧光染料
进行500-2000倍稀释，配制成染色工作液B。
细胞染色：
悬浮细胞：
1． 用PBS洗涤细胞2次。
2.加入适量体积的染色工作液重悬细胞，使其密度大约为1×10的6次方/mL。
3.在37℃孵育细胞5~20分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。可以用20分钟作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。
【注】
若染色不够充分，建议增加染料浓度或延长染色时间，
4.在500×g离心5分钟。
5.倾倒上清液，再次缓慢加入37°C预热的PBS或培养基重悬细胞。
6.重复（4），（5）步骤两次以上。
贴壁细朐染色
1用PBS洗涤细胞2次。
2.细胞培养板中或细胞爬片上加入适量体积的染色工作液。
【注】
●96孔细胞培养板每孔加入100μl染色液即可。
3.37°C孵育细胞5~20分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。可以用20分钟作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。
【注】
●若染色不够充分，建议增加染料浓度或延长染色时间。
4.吸干染色工作液，用PBS或培养基洗培养板或盖玻片2~3次，每次用预热的培养基覆盖所有细胞，孵育5~10分钟，然后吸干培养基。
激光共聚焦观察：
激发波长488nm，探针A 最大发射波长为500nm，探针B最大发射波长为616nm。
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