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产品概述
product description
细胞焦亡（Pyroptosis）是一种由炎症信号触发的程序性细胞死亡方式，其核心特征是细胞膜穿孔、细胞肿胀破裂，依赖于炎性半胱天冬酶（主要是caspase-1，4，5，11），并伴随大量促炎因子（如IL-1β、IL-18）的释放。细胞焦亡的形态学特征、发生及调控机制等均不同于凋亡、坏死等其他细胞死亡方式。 贝博® BBcellProbe® 细胞焦亡检测试剂盒是采用绿色荧光检测细胞焦亡相关蛋白酶Caspase的活化情况和蓝色荧光检测细胞质膜破裂情况来测定细胞焦亡。
保存温度
2-8℃ 避光
注意事项
1.焦亡试剂AC短期4℃避光保存，长期-20℃避光保存；避免反复冻融。
2.焦亡试剂AC在冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。融解后离心至管底部再打开螺旋盖。可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。
2.焦亡试剂AC在冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。融解后离心至管底部再打开螺旋盖。可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。
有效期
6个月
检测方法
1.荧光酶标仪 2. 荧光光度计 3.激光共聚焦显微镜 4.流式细胞仪
适用样本
细胞
仪器准备
1.荧光酶标仪
2.荧光光度计
3.共聚焦显微镜
4.离心机
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒
2.荧光光度计
3.共聚焦显微镜
4.离心机
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液
2.HBSS
3.纯水
2.HBSS
3.纯水
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
4.黑色透明底细胞培养板
2.吸头
3.一次性手套
4.黑色透明底细胞培养板
使用注意事项
1.焦亡试剂避光保存，使用过程中尽量避光。
2.试剂为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
3.使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。
4.每个样需要准备两份，分别用于caspase活性检测和细胞膜完整性检测。
5.以下以原位染色为例，也可以收集细胞后染色。
2.试剂为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
3.使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。
4.每个样需要准备两份，分别用于caspase活性检测和细胞膜完整性检测。
5.以下以原位染色为例，也可以收集细胞后染色。
使用方法
三、 焦亡检测
1. 用荧光设备检测细胞焦亡情况。
激发波长488nm，发射波长526nm。
2. 荧光强度与焦亡活性程度成正比。
正常细胞不能着色，焦亡细胞呈绿色。
四、 焦亡检测
1. 用荧光设备检测结果。
探针的最大激发波长为348 nm，最大发射波长为468 nm。
2. 结果分析 ：
正常细胞不能着色，焦亡细胞呈蓝色荧光。
荧光强度强，焦亡细胞比例高。
1. 用荧光设备检测细胞焦亡情况。
激发波长488nm，发射波长526nm。
2. 荧光强度与焦亡活性程度成正比。
正常细胞不能着色，焦亡细胞呈绿色。
四、 焦亡检测
1. 用荧光设备检测结果。
探针的最大激发波长为348 nm，最大发射波长为468 nm。
2. 结果分析 ：
正常细胞不能着色，焦亡细胞呈蓝色荧光。
荧光强度强，焦亡细胞比例高。
常见问题分析
焦亡活性检测方法常见的问题主要为测得的荧光值偏低，颜色变化不明显，无法显示与对照组细胞的差异，其可能的原因主要集中在以下几个方面：
1. 样品中激活的焦亡水平偏低：首先确认模型的焦亡现象是否明显，以及根据文献和其他验证方法确认该样本是否激活焦亡。
2. 检测时间点的选择是否合适：不论哪种通路的焦亡，需要在焦亡被有效激活并达到相应活化程度后的一定时间范围内检测，过早或过晚均不合适。
3. 不适合本方法检测：某些焦亡诱导剂诱导的焦亡可能是非依赖于该试剂盒检测指标活化的机制，此种情况时利用本试剂盒检测焦亡无明显变化，需要考虑焦亡机制的其他通路。
1. 样品中激活的焦亡水平偏低：首先确认模型的焦亡现象是否明显，以及根据文献和其他验证方法确认该样本是否激活焦亡。
2. 检测时间点的选择是否合适：不论哪种通路的焦亡，需要在焦亡被有效激活并达到相应活化程度后的一定时间范围内检测，过早或过晚均不合适。
3. 不适合本方法检测：某些焦亡诱导剂诱导的焦亡可能是非依赖于该试剂盒检测指标活化的机制，此种情况时利用本试剂盒检测焦亡无明显变化，需要考虑焦亡机制的其他通路。
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