细胞自噬检测试剂盒(红色荧光)

BB-481312
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  • 200T
价格
  • ¥2200元
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产品概述 product description

贝博® BBcellProbe® 细胞自噬检测试剂盒是采用M52染色法染色细胞内自噬体的检测试剂盒,该产品可代替传统LC3-GFP法,通过荧光示踪物来选择性检测自噬通路中的各种囊泡包括自噬前体、自噬体和自噬溶酶体,无需转染,就能在荧光显微镜下跟踪活细胞的自噬过程进行定量分析,或用流式细胞仪进行高通量筛选,甚至能标记原代细胞。并且该产品可以进行自噬通路的动力学分析,为研究者展现自噬体形成和消除之间的动态平衡。 贝博® BBcellProbe® 细胞自噬检测试剂盒中的BBcellProbe® M52自噬体染色探针为红色荧光标记的自噬体探针,BBcellProbe® M52具有细胞渗透性可以自由地跨膜,渗透进入自噬溶酶体等,,具有460 nm / 640 nm的最大激发/发射波长。 自噬(autophagy)是细胞受到刺激后吞噬自身的细胞质或细胞器,最终将吞食物在溶酶体内降解的过程,自噬体(autophagosome)为双层膜包被的圆形或椭圆形结构,内含细胞质、长寿蛋白质和异常蛋白聚集物,损伤或多余细胞器如线粒体、粗面内质网和微体、病毒和细菌等。自噬是溶酶体介导的胞内降解途径,是真核细胞在恶劣环境(比如营养缺乏)威胁时引发的降解和细胞内容物再循环的过程。这一途径在对各种应激条件进行应答从而在促进细胞内环境平衡、能量平衡和细胞存活上具有重要的作用,更多的证据表明自噬功能与多种疾病密切相关,包括癌症、神经退行性疾病、糖尿病、自身免疫性疾病和心血管疾病。 自噬体是自噬的标志性结构。自噬体属于亚细胞结构,直径一般为300~900nm,平均500nm,普通光镜下看不到。通过透射电子显微镜发现自噬体一直是观察自噬现象最直接、最经典的方法,是自噬检测的“金标准”。自噬体通常是双层膜结构包含着待消化降解的胞质成分或细胞器(如线粒体或内质网片段)。电镜下自噬体内容物的形态和电子密度与胞质中的一致,因此容易识别。自噬体融合成自噬溶酶体后,则变成单层膜结构,其中含有降解不同阶段的胞质成分。 贝博® BBcellProbe® 可以提供各种细胞分析试剂盒。包括细胞凋亡、活性、增殖、毒性、活性氧、周期、细胞代谢、氧化应激、膜流动性、膜电位、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、胞外酸化、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种细胞检测试剂盒产品。 贝博® BBcellProbe® 可以为您提供各种细胞成像、细胞示踪与追踪试剂盒产品。包括各种颜色的BBcellProbe® M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品,以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。 贝博® BBcellProbe® 可以提供动物、植物、微生物、酵母、水产、家禽、兽类、土壤等样本的各种生化指标检测的数百种试剂盒产品。 贝博® BBcellProbe® 可以提供各种细胞、组织染色,免疫组织化学,细胞培养等相关试剂盒产品。

保存温度
2-8℃ 避光
注意事项
1.染料长期不用可以-20℃保存。
2.避免反复冻融。

有效期
一年
检测方法
激光共聚焦/荧光显微镜/流式细胞仪
适用样本
动物细胞
产品特点
1.无需转染,可在活细胞内定量检测细胞自噬情况,可在活细胞内定量检测自噬小泡和监控活细胞自噬流(自噬体的合成、自噬底物到溶酶体的运输、自噬底物在溶酶体的降解过程);
2.适用于流式细胞检测和显微镜分析;
3.可用于高通量筛选自噬的激活剂和抑制剂;
4.可选择性地对前自噬体、自噬体和自噬性溶酶体进行染色,而对溶酶体染色较少。
产品应用
激光共聚焦/荧光显微镜/流式细胞仪
仪器准备
1.激光共聚焦/荧光显微镜/流式细胞仪
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液 2.HBSS
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
1.预实验很重要。必须要做预实验,在正式实验之前取少量样本优化实验条件,并像正式样本一样认真进行,看实验结果是否可行,实验条件是否适合自己的样本。由于生物样本的多样性,不同样本的实验条件通常差异较大,同种细胞的不同模型下需要的实验条件也可能不同,为了避免浪费正式样本和试剂,一定要提前预实验优化实验条件。
2.使用前,先将本品取出回温至室温,并对其进行简短离心使溶液集中于管底。
3.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
4.标记的条件因细胞种类而异,根据不同样本的实际染色结果做相应调整,在每次实验前,请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化,确定最佳条件。以下方法仅供参考。
5.染色后立即进行分析。
6.自噬过程很快,通常被诱导后8分钟即可观察到自噬体(autophagosome)形成,2小时后自噬溶酶体(autolysosome)基本降解消失。
使用方法

1. 染色工作液配制:
根据样本数量,用检测缓冲液将M52荧光染料10倍稀释,再用相应的培养基或者HBSS缓冲液20倍稀释,配制成染色工作液。

2. 细胞染色
2.1 对于贴壁细胞
1)将细胞置于培养皿中的盖玻片上,加入合适培养基,使其爬片生长。
2)待细胞生长到合适丰度,吸除培养液,加入适量37℃预热的含M52探针工作液。于生长状态下孵育15 -30分钟(具体孵育时间需根据细胞类型而定)。
3)利用新鲜培养基或PBS替换上述染色液并在荧光显微镜(含合适滤片)下观察。

2.2 对于悬浮细胞
1)离心,吸除上清。
2)利用37℃预热的探针工作液重悬细胞,于生长状态下孵育15 -30分钟(具体时间需根据细胞类型而定)。
3)离心,吸除染色液,加入新鲜培养液或PBS重悬细胞。
4)置于荧光镜下观察或流式检测。

3. 观察结果:
在荧光显微镜(含合适滤片)/酶标仪/流式细胞仪下观察细胞。
最大激发/发射波长为488 nm / 640 nm。

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