2-8℃ 避光

1. 试剂A为无菌溶液，注意防止污染。
2. 试剂B避免反复冻融。需要长期保存时可以根据使用情况进行小量分装后-20℃保存。
3. 试剂拆封后请尽快使用完！

一年

酶标仪

动物贴壁细胞

1.方便：可用酶标仪检测；
2.快速：最快1小时内即可完成实验；
3.灵敏：数据可靠，重现性好，线性范围更宽；
4.准确：试剂本身稳定性高，实验结果稳定可靠。

酶标仪

1. 酶标仪
2. 离心机
3. 移液器
4. 冰箱
5. 冰盒

1.PBS缓冲液
2.HBSS

1.离心管
2.吸头
3.一次性手套

1. 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体损失导致试剂量不够用。
2. 细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。离心力在不损失细胞的前提下尽可能小，重悬细胞是动作要轻柔，避免多次反复的激烈吹打。不用涡旋振荡器。
3. 染色培养时间根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少而异。一般情况下，白细胞较难染色，因此需要较长的培养时间。培养时间一般为1- 4小时，但在培养30分钟左右即可取出肉眼观察染色程度 (根据细胞种类而定，需要摸索一下条件)。当使用标准96孔板时，贴壁细胞的最小接种量至少为1,000 个/孔 (100 μl 培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于2,500 个/孔 (100 μl 培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验，请先计算每孔相应的接种量，并按照每孔培养基总体积的10%加入染色液B。
4. 有条件的情况下建议采用多通道移液器，可以减少平行孔间的差异。加染色液B试剂时，建议斜贴着培养板壁加，不要插到培养基液面下加，容易产生气泡，会干扰O.D值读数。
5. OD值在0.4-2.0之间均可，最大值控制在接近1.0左右为宜，小于0.4或大于2.0请调整接种量和培养时间。

包被：
1. 96孔板每孔加入50 μl -100 μl包被液。
2. 将培养板置2-8°C过夜。
3. 移除包被液。
4. 干燥培养器皿。室温下置通风橱内风干数分钟即可完成干燥，至肉眼观察完全干燥。
5. 用洗涤液洗涤1-3次。

细胞接种：
1. 待测定细胞处理好后，用胰酶消化，PBS洗涤，然后用相应培养基重悬，制成细胞悬液。
2. 按5×104-5×105细胞/孔接种96孔板，建议设3-5个复孔。
3. 放37℃培养箱孵育30分钟-2小时。
4. 取出培养板，吸弃培养基。
5. 然后用相应的培养基洗涤2-3次。
6. 每孔加入100 μl新鲜培养基。

粘附率检测：
1. 96孔板每孔加入10 μl细胞染色液B。
2. 在37℃孵育1-12 小时。
3. 测定样品孔OD值。测定570 nm各孔的吸光值。
4. 细胞粘附率计算。
将各测试孔的OD值减去空白孔（未加细胞孔）OD值。各重复孔的OD值取平均数。
细胞粘附率% =（（待测细胞OD - 空白OD）/（对照细胞OD - 空白OD））×100

1. Guanghua Qin et al.
Hsa_circ_0032463 acts as the tumor promoter in osteosarcoma by regulating the miR‑330‑3p/PNN axis
International Journal of Molecular Medicine 2021

2. Jiong Lyu et al.
KLF7 is associated with poor prognosis and regulates migration and adhesion in tongue cancer
Oral diseases 2021

3. Huiqin Chen et al.
Repeated radon exposure induced lung injury and epithelial–mesenchymal transition through the PI3K/AKT/mTOR pathway in human bronchial epithelial cells and mice
Toxicology Letters 2020

4. Aihua Liu et al.
Down-regulation of NTSR3 inhibits growth, metastasis, and PI3K/AKT and MAPK signaling pathways in colorectal cancer cells
Biochemistry and Cell Biology 2020

5. Bo Tang et al.
Ionizing radiation induces epithelial mesenchymal transition in human bronchial epithelial cells
Bioscience Reports 2020

6. Bing Liu et al.
Protective effect of KLF15 on vascular endothelial dysfunction induced by TNF‑α
Molecular Medicine Reports 2018