-20℃避光保存

1. 探针染料短期2周内可以2-8℃保存。探针长期不用可以-20℃保存。避免反复冻融。
2. 探针染色液A为DMSO溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3. 可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
4. 试剂拆封后请尽快使用完！

6个月

1. 流式细胞仪
2. 荧光显微镜
3. 激光共聚焦

1. 悬浮细胞
2. 贴壁细胞

1. 激光共聚焦/荧光显微镜/荧光酶标仪/光度计/流式细胞仪
2. 离心机
3. 移液器
4. 冰箱
5. 冰盒

1. PBS缓冲液或者HBSS

1. 离心管
2. 吸头
3. 一次性手套

1. 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
2. 钙离子染色液为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
3. 探针为了便于观察防止误操作导致损失，在试剂盒中时是采用透明管包装，收到后可以离心移入干燥黑色避光密封管或者用铝箔包裹避光。
4. 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
5. 细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
6. 染色后立即进行分析。
7. BBcellProbe® C95探针容易受潮，稳定性较差，注意干燥保存。从冰箱取出后，请确认在干燥的环境放至室温后再开封。
8. BBcellProbe® C95探针母液时要用干燥的新吸头，不能使用含水的吸头。
9. 未使用完的BBcellProbe® C95探针母液请拧紧螺旋盖，避免受潮失效。母液遇水极易分解，如果长期不用，建议根据每次使用量分装保存，用封口膜封口，并用铝箔纸包裹，放在一个密闭性能好的塑料袋中，并放入一包干燥剂，在≤-20℃密封避光保存。
10. BBcellProbe® C95探针工作液含水，配制后不可以长期保存，须现配现用。
11. BBcellProbe® C95融解后离心至管底部再打开螺旋盖，防止开盖时损失。
12. 可以在染色工作溶液中加入20% Pluronic F127溶液（可选步骤），Pluronic F127 可以帮助BBcellProbe® C95更快进入细胞，不建议在Pluronic F127中长期保存BBcellProbe® C95溶液。
13. 标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先确定最佳条件。在正式实验前先摸索一下细胞量、钙离子荧光探针的终浓度、培养时间等，找到最佳实验条件。以下方法仅供参考。

1. 染色工作液的配制：
用 HBSS 稀释 BBcellProbe® C95溶液1000倍，配制成BBcellProbe® C95染色工作液。
2. 收集培养好的待测细胞样本，用HBSS洗涤细胞3次。
3. 离心去上清后，将 BBcellProbe® C95染色工作液加入细胞，在37℃孵育30 -120分钟。
4. 用HBSS洗涤细胞2-3次。
5. 用HBSS重悬细胞。在37℃下再继续孵育20-40分钟。
6. 然后用该细胞进行荧光钙离子检测。
激发波长 548 nm，发射波长578 nm。
钙离子浓度增高，荧光增强。

1. Qin Xie et al.
Glial-derived neurotrophic factor regulates enteric mast cells and ameliorates dextran sulfate sodium-induced experimental colitis
International Immunopharmacology 2020

2. Shuai Liu et al.
G protein-coupled estrogen receptor 1 mediates estrogen effect in red common carp (Cyprinus carpio)
Comparative Biochemistry and Physiology Part C: Toxicology & Pharmacology 2020

3. QiuNan Chen et al.
Effect of sarcolipin-mediated cell transdifferentiation in sarcopenia-associated skeletal muscle fibrosis
Experimental Cell Research 2020