2-8℃ 避光

1. 正式实验前请选取几个样本做预实验，以优化实验条件，取得最佳实验效果。
2. 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
3. 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
4. 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
5. 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
6. 实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。

6个月

酶标仪

1.动物细织
2.血清/血浆等液体样本

1.快速简便：全程约50分钟，可测100例左右样本。
2.取样量微：本法取样本量约为150μl。
3.稳定性好：试剂盒2～8℃存放6个月有效。
4.再现性好：变异系数CV=1.7%。
5.回收试验： X =103.3%。
6.受外界影响因素小：干扰因素少，重复性强。
7.测试面广：可测动物血清（浆）、动物组织等，效果均佳。

酶标仪

1.酶标仪
2.振荡器
3.匀浆机/匀浆器
4.涡旋混匀器
5.移液器
6.冰箱

1.纯水
2.冰醋酸
3.95%乙醇或无水乙醇
4.蛋白定量试剂盒（组织样本）

1.96孔板
2.吸头
3.一次性手套
4.离心管

1.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
2.维生素C标准品易氧化，因此，最好在样本上清液制备好后再配置标准溶液，并在10 min内进行检测；

一、试剂配制：
1. 试剂A工作液的配制：
临用前按试剂A：纯水=1:14稀释，混匀备用；
2. 试剂B工作液的配制：
临用前将1支粉剂加0.36 ml的冰醋酸再加纯水至40 ml，溶解，4℃保存备用；
3. 试剂C工作液的配制：
因较难溶解，临用前2~4小时加95%乙醇或无水乙醇60 ml充分溶解，4℃保存备用；
4. 试剂D工作液的配制：
临用前取0.15 ml试剂D加纯水至25 ml（需现配现用）；
5. 600 μg/ml Vc标准品工作液的配制：
将1支Vc标准品粉剂溶于10 ml试剂A工作液，即可；
6. 6 μg/ml Vc标准品工作液的配制：
取600 μg/ml Vc标准品工作液再用试剂A工作液100倍稀释即可，需现配现用；
【注】：
 维生素C标准品易氧化，因此，最好在样本上清液制备好后再配置标准溶液，并在10 min内进行检测；

二、样本的前处理：
上清液的制备：取待测样本30 μl加试剂A工作液90 μl，漩涡混匀，放置15 min后离心，3500~4000 RPM，离心10 min，上层清亮液体为上清液；
【注】：
 组织样本处理：准确称取组织质量，用生理盐水为匀浆介质制备10%组织匀浆（脑组织制备成20%匀浆），每100 mg组织加入900 μl生理盐水，用匀浆器充分匀浆，1000 g离心10分钟取上清，然后按上述步骤处理。
 组织样本测定需要进行蛋白定量。
 液体样本可直接取30 μl加试剂A工作液处理制备上清液。

三、样本的测定：
试剂（μl） 空白孔 标准孔 样品孔
试剂A工作液 80
6μg/ml Vc标准品工作液 80
样品上清液 80
试剂B工作液 100 100 100
试剂C工作液 200 200 200
试剂D工作液 50 50 50
充分混匀，37℃水浴（或气浴）30 min
试剂E 20 20 20

充分混匀，室温离心10 min，
取上清300 μl加入96孔板，
波长536 nm，纯水调零，测定各孔的吸光度值。

四、计算公式：
1、液体样本的计算公式：
Vc含量 = 样品OD值 - 空白OD值 x 标准浓度 x 样本前处理
（μg/ml） 标准OD值 - 空白OD值 （6 μg/ml） 稀释倍数（4倍）

2、组织样本的计算公式：
Vc含量 = 样品OD值 - 空白OD值 x 标准浓度 x 样本测试前
（μg/mgprot）标准OD值 - 空白OD值 （6 μg/ml） 稀释倍数（4倍）

÷待测匀浆蛋白浓度
（mgprot/ml）