

总蛋白(Total Protein,TP)由白蛋白和球蛋白组成,检测白蛋白的方法有双缩脲法、色氨酸法、染料结合法,其中检测白蛋白的染料结合法可采用溴甲酚绿或溴甲酚紫染料结合,上述染料对白蛋白具有高度的亲和力,通常监测染料与白蛋白结合的初速率,该速率与样品中白蛋白浓度成正比。
贝博®白蛋白检测试剂盒(溴甲酚紫微板法)检测原理是在酸性环境下,白蛋白分子带正电荷,与带负电荷的溴甲酚紫(Bromocresol purple,BCP)结合生成绿色复合物,在603nm处有吸收波,该复合物的吸光度与白蛋白浓度成正比,与同样处理的白蛋白标准比较,求得待测样品中白蛋白浓度,可用于人或动物血清、血浆、组织等样本中的白蛋白含量测定,该法操作简单、方法特异,既可手工操作,又可采用自动分析仪检测,对血清清蛋白的特异性比BCG法(溴甲酚绿法)要好,不易受时间和温度变化的影响。
该试剂盒仅用于科研领域,不适用于临床诊断或其他用途。
贝博® BBcellProbe® 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。
贝博® BBcellProbe® 可以为您提供各种颜色的BBcellProbe® M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品,以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。
贝博® BBcellProbe® 可以提供动物、植物、微生物、酵母、水产、家禽、兽类、土壤等样本的各种生化指标检测的数百种试剂盒产品。
2.生理盐水或PBS
2.吸头
3.一次性手套
4.离心管
1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体收集至管底,避免开盖时液体损失导致试剂量不够用。
2.严重脂血对测定有干扰,应加做标本空白予以校正;
3.如果没有酶标仪,也可以用分光光度计测定,使用分光光度计测定蛋白浓度时,每个试剂盒可以测定的样品数会显著减少;
4.本试剂盒的线性范围为4-80g/L ;
5.该法测定正常样本的批间变异系数为6.3%。
6.CV可达0.45%,回收率可达99.3~102%,平均回收率达100.5%;
7.经贝博测定白蛋白标准溶液(40mg/ml)其吸光度减去空白吸光度差值在0.15~0.4之间;如果样品浓度过低,可能导致样品吸光度与标准孔吸光度之间差异不大,其避免方法为:增加标准品和(或)待测样品的量以提高差异性,可使标准品和(或)待测样品从1.4ul增加至5ul之间的量。其计算公式应调整为:白蛋白浓度(g/L)= (A样品/A标准)X白蛋白标准溶液浓度(g/L)X(1.4/实际加入样品微升数)
8.白蛋白标准配制成溶液后应尽快使用或-20℃冻存。
1.血清、血浆样本: 按常规方法制备,可以直接用于本试剂盒的测定,取1.4ul检测;
2.组织样本:按组织重量(g):生理盐水或pbs(ml)=1:9比例,加入9倍体积的生理盐水或PBS,冰浴下匀浆后,2500g离心10min,取1.4ul上清待测;
试剂配制:
白蛋白标准溶液(40mg/ml)配制:取0.4ml提取试剂加入到0.1ml白蛋白标准储备液(200mg/ml)中,充分混匀后即得,配制后应立即使用,用不完可-20℃冻存;
注: 待测蛋白溶解于什么样的稀释液中,白蛋白标准也宜溶解于什么样的稀释液中;
例如:待测蛋白溶解于蔗糖,亦取白蛋白标准溶解于蔗糖,一般也可以用0.9%Nacl或PBS作为白蛋白标准品的稀释液。
BCP试剂的配制:
按10ul BCP储备液加入10ml BCP空白试剂混合即可,混合后应2~8℃避光保存,1个月有效。
白蛋白的加样:
按照下表设置空白孔、标准孔、样品孔,溶液应按照顺序依次加入,并注意避免气泡的产生。
如果样品中素浓度过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。样品的检测最好能设置平行孔。
白蛋白的测定:
顺序加入BCP试剂并立即混匀,室温放置(30±3)s,以空白孔调零,酶标仪603nm处测定标准孔、样品孔吸光度(即为A标准、A样品)。
(备选步骤)当遇到脂血混浊,可设样品空白孔:取1.4ul的待测样品,加入280ulBCP空白试剂,以BCP空白试剂调零,读取样本空白孔的吸光度,用样品孔吸光度减去样品空白孔吸光度后的净吸光度,计算白蛋白浓度。
结果计算:
白蛋白浓度(g/L)= (A样品/A标准)X白蛋白标准溶液浓度(g/L)
式中:A样品为样品孔的吸光度;
A标准为标准孔的吸光度;
参考区间:
健康成年人: 36-46g/L
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