总巯基检测试剂盒-微孔板

BB-47246
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产品概述 product description

贝博TM BBcellProbe® 总巯基检测试剂盒是利用经典的Ellman法进行总巯基检测的试剂盒。试剂盒准确性高，重复性和抗干扰性强，使用方便，可用于测各种动物的血清/血浆、组织、细胞、培养液以及植物组织样本等。 生物体内活性巯基（SH）主要包括谷胱甘肽巯基和蛋白质巯基。谷胱甘肽巯基能够修复氧化损伤的蛋白质，参与活性氧清除。蛋白质巯基主要存在于半胱氨酸，是蛋白质结构和生物体内某些氧化还原反应重要基团，在蛋白质结构中2个巯基脱氢而形成的双硫键，使相邻多肽得以连接．对于维持蛋白质完整结构作用十分重要。 巯基还是很多酶的活性基团，一些重金属盐如Hg2+等与酶巯基结合，影响酶活性。巯基化合物与机体许多机能活动，药物及毒物的作用以及某些疾病的发生发展有着密切关系。 所有动物组织都含有不同量的活性巯基，测定组织和血液中巯基含量已日益为人们所重视,以期探索对某些疾病的发生机理、治疗、预防以及预后判断等方面的研究意义。 通过测定总巯基含量和GSH含量，能够间接测定蛋白质巯基含量。 贝博TM BBcellProbe® 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。 贝博TM BBcellProbe® 可以为您提供各种颜色的BBcellProbe® M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品，以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。

保存温度
2-8℃ 避光
注意事项
开盖后组份按要求条件保存。
有效期
6个月
检测方法
分光光度计
适用样本
血清、血浆、尿液、细胞培养上清、细胞裂解液、组织裂解液
产品应用
分光光度计
仪器准备
1.分光光度计
2.恒温水浴锅
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰盒

试剂准备
1.生理盐水
2.纯水
3.蛋白定量试剂盒
耗材准备
1.96孔板
2.吸头

使用注意事项
1.试剂B2干粉开盖使用前先敲入瓶底部，防止开盖时洒落导致损失。
2.血清/培养液等液体样本直接检测或用生理盐水稀释后检测。
3.最低检出限为10μmol/L。
使用方法
1. 样品准备
组织样本：按照组织质量（g）：生理盐水体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 生理盐水）进行冰浴匀浆，然后8000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
血清，培养液：直接测定。

2. 试剂配制：
使用前，准确吸取10ml试剂B1加入试剂B2干粉，充分溶解混匀，即成试剂B工作液，4℃避光保存。

3. 酶标仪预热30min，调节波长至412nm，蒸馏水调零。

4. 总巯基的测定
按下表在96孔板中加入试剂，对照孔每个样品均做。
混匀，25℃静置10min，测定412nm 吸光值。
ΔA=A 测定-A 对照。
【注】：
 如果OD值太大，可以将样品用试剂A稀释后再检测。

5. 计算
血清中总巯基含量（mmol/L）
=ΔA ÷0.8618×V 反总÷V 样×103
=5800×ΔA

组织细胞中总巯基含量（mmol/g）
（1）按样本重量计算
总巯基含量（μmol/g 鲜重）
=ΔA ÷0.8618×V 反总÷（V 样÷V 样总×W）
=5.8×ΔA÷W

（2）按样本蛋白浓度计算
总巯基含量（μmol/mg prot）
=ΔA ÷0.8618×V 反总÷（V 样×Cpr）
=5.8×ΔA÷Cpr

【注】：
V 反总：反应总体积，0.2mL；
V 样：反应中样品体积，0.04mL；
V 样总：加入提取液体积，1mL；
W：样品质量，g ；
Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；
103 ：1mmol/ L=103μmol/ L

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