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谷胱甘肽S—转移酶（glutathione S—transferase GST）是一类与肝脏解毒有关的酶，在肝细胞中存在量很大，所以当肝细胞受损害时，GSH-ST常常很早释放到血中，血中GSH-ST的升高常常早于谷丙转氨酶（SGPT）和谷草转氨酶（SGOT），因而GSH-ST的升高可作为肝脏损伤的敏感指标。 谷胱甘肽S—转移酶广泛存在于哺乳动物各组织中，催化谷胱甘肽（GSH）与化学物质的亲电子基团结合，最终形成硫醚氨酸排出体外，在体内解毒功能上起重要作用。GSH-ST具有消除体内过氧化物及解毒双重功能。GST在谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）活力低下的条件下，只有清除体内脂质过氧化物（LPO）的功能。 GST具有催化还原型谷胱甘肽（GSH）与1-氯-2,4-二硝基苯（CDNB底物）结合的能力，在一定反应时间内，其活性高低与反应前后底物浓度的变化呈线性关系。 本试剂盒适用于测定血清（浆）、组织、培养细胞等样本中的GST的活性。 贝博TM BBcellProbeTM 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、 细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。 贝博TM BBcellProbeTM 可以为您提供各种颜色的BBcellProbeTM M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品，以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。
2.恒温水浴锅
3.漩涡混匀器
4.离心机
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒
2.无水乙醇
2.吸头
2.试剂B配制时要加热充分溶解（温度可达90-100℃）；
3.肝素抗凝全血放置冰箱存放时间不可超过3天，血浆、组织块放-20℃可保存一个月；
4.试剂A配成储备液后，冰箱冷藏至少可保存一个月；
5.1mmol/L的GSH底物现配现用；
6.上清液当天提取当天测定；
7.样品前处理参照实验方法学部分；
1. 试剂A1的配制：
使用前将A1粉剂加1ml无水乙醇充分溶解2-8℃保存。
2. 试剂A工作液配制：
使用前将配制好的试剂A1：A2按1:59的比例进行配制，现配现用；
3. 试剂B工作液配制：
使用前将粉剂B1加90~100℃的热纯水170ml，充分溶解，将配制好的B1和B2两种溶液充分混匀，得到的为过饱和溶液，室温保存；如果出现结晶，直接取上清进行实验；
4. 试剂C工作液配制：
加纯水200ml，充分溶解后，室温保存；可以保存在赠送的塑料瓶中。
5. 试剂D工作液配制：
加纯水50ml，充分溶解后，2-8℃避光保存；
6. 试剂F工作液配制：
将试剂F：标准溶剂储备液：纯水=1:9的比例10倍稀释；
7. 标准品的配制：
1mmol/L的GSH标准溶液的配制：取3.07mg的GSH标准品一支加到已配好的试剂F工作液10ml中混匀溶解；
20umol/L的GSH标准溶液的配制：取1mmol/L的GSH标准溶液0.2ml加试剂F工作液9.8ml中混匀溶解；
8. 基质液的配制：
试剂A工作液与1mmol/L的GSH标准溶液以1:1混合。
操作步骤：；
(一)、样本前处理
1. 50倍稀释的溶血液的配制：取肝素抗凝全血20ul，以纯水稀释至1ml，混匀，放置5min进行测定；配制好的溶血液要在1小时内测定完，否则影响酶活力；抗凝全血若当天来不及测定可冰箱2-8℃保存，2-3天内酶活力变化不大；
2. 组织匀浆的制备;
（1）取组织块（0.2-1g）最少可到2-5mg，在冷的生理盐水中漂洗，去除血液，擦拭干，称重，放入5或10ml的小烧杯中；
（2）加入预冷的匀浆介质（ph7.4的0.01mol/L Tris-Hcl，0.0001mol/L EDTA-2Na，0.01mol/L蔗糖0.8%的氯化钠溶液）或者用0.86%冷生理盐水，加入的体积总量为组织块重量的9倍。将组织块尽可能的剪碎。
（3）机械匀浆：用组织捣碎机10000-15000r/min 上下研磨制成10%匀浆。
（4）将制备好的10%匀浆用普通离心机或低温低速离心机3000r/min左右离心10-15min，取上清待测；
3. 线粒体及微粒体的制备：
（1）制备10%组织匀浆（制备方法同上）；
（2）制备线粒体：取10%组织匀浆，用普通离心机或低温低速离心机以1000-2000r/min离心10min，取上清以8000-10000r/min（低温高速离心机）离心15min，沉淀即为线粒体；
（3）制备微粒体：取分离线粒体后的上清液，以144000g离心30min，沉淀为即为微粒体；
（4）将分离的线粒体或微粒体分别用冰冷的匀浆介质制备成混悬液，机械或手工匀浆使其破碎，待测酶活力；也可反复冻融使其破碎，但有部分酶活会受影响。
4. 血清、血浆可直接取样；
（二）、血清样本操作表
计算公式：
1. 血清GST活力单位定义：
每毫升血清（浆）在37℃的反应1min，扣除非酶促反应，使反应体系中GSH浓
度降低1umol/L为1个酶活力单位；
2. 计算公式：
血清（浆）GST活力 = 对照OD值–测定OD值X 标准品浓度 X 反应体系稀释÷ 反应时间
（U/ml） 标准OD值-空白OD值 （20umol/L） 倍数（6倍） （30min）
÷ 样本取样量（0.1ml）
（二）、组织样本操作表
酶促反应：
显色反应：
计算公式：
1. 组织样本GST活力单位定义：
每毫克组织蛋白在37℃的反应1min，扣除非酶促反应，使反应体系中GSH浓
度降低1umol/L为1个酶活力单位；
2. 计算公式：
组织中GST活力 = 对照OD值–测定OD值X标准品浓度 X反应体系稀释÷反应时间÷取样量
（U/mgprot） 标准OD值-空白OD值 （20umol/L） 倍数（6倍） （10min）（0.1ml）
÷ 待测样本蛋白浓度
（mgprot/ml）
【注】：mgprot/ml表示蛋白浓度为毫克蛋白/毫升。
（三）50倍稀释溶血液样本检测：
酶促反应：
显色反应：
计算公式：
1. 全血中GST活力单位定义：
每毫升全血在37℃的反应1min，扣除非酶促反应，使反应体系中GSH浓
度降低1umol/L为1个酶活力单位；
2. 计算公式：
全血GST活力 = 对照OD值–测定OD值X 标准品浓度 X 反应体系稀释÷ 反应时间
（U/ml） 标准OD值-空白OD值 （20umol/L） 倍数（6倍）（30min）
÷ 全血取样量（0.004ml）
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