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产品概述
product description
谷胱甘肽GSH是一种低分子自由基清除剂，它可清除O2-、H2O2、LOOH。存在于几乎身体的每一个细胞，参与细胞许多功能活动，是一种氧自由基消除剂。谷胱甘肽是研究活性氧和自由基的重要指标，亦是机体氧化物牵累的重要指标。 还原型谷胱甘肽是蛋氨酸、甘氨酸和半胱氨酸组成的一种小分子肽，是组织中主要的非蛋白质的巯基化合物，并且是GPX和GST两种酶类的底物，为这二种酶分解氢过氧化物所必需，并且能稳定含巯基的酶和防止血红蛋白及其它辅因子受氧化损伤。能可逆的转变为氧化型谷胱甘肽(GSSG)，其存在形式会随着细胞内代谢的情况而发生相互转变。GSH也参与使VE恢复到还原态的作用。GSH在防止动脉粥样硬化、冠心病、防衰老、抗肿瘤、防老年性痴呆等疾病的预防、恢复、治疗的研究过程中起到重要参考作用。 贝博TM BBcellProbe® 还原型谷胱甘肽(GSH)检测试剂盒是一种简单易行的检测还原型谷胱甘肽的试剂盒，其检测原理是待测样品中的还原型谷胱甘肽(GSH)与发色底物DTNB反应，产生稳定黄色的TNB和GSSG，获得样品的GSH含量。该试剂盒可用于检测血浆、血清、组织、细胞等样品中还原型谷胱甘肽(GSH)含量。 贝博® BBcellProbe® 可以提供各种细胞检测试剂盒。包括细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。
保存温度
2-8℃ 避光
注意事项
开盖后组份按要求条件保存。
有效期
6个月
检测方法
分光光度计
适用样本
血浆/组织/细胞
产品应用
分光光度计
仪器准备
1.分光光度计（对应波长的酶标仪）
2.恒温水浴锅
3.低温离心机
4.电子天平
5.匀浆器或研钵
6.移液器
7.冰盒
2.恒温水浴锅
3.低温离心机
4.电子天平
5.匀浆器或研钵
6.移液器
7.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液
2.纯水
2.纯水
耗材准备
1.比色皿
2.试管
3.吸头
4.一次性手套
2.试管
3.吸头
4.一次性手套
使用注意事项
1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
2.建议第一次测定时先做2-3个样品的本底对照（空白对照），如果样本空白对照与空白管非常接近，则说明样品液中不存在干扰物质，可以不再检测样本本底对照；如果样品空白对照与空白管有显著差异，则在测定每个样本时都需要做样本的空白对照；
3.GSH比较稳定，血液样本以ACD抗凝后冰箱4℃保存，3周内稳定。
4.请尽量使用新鲜的细胞进行测定，而不要使用冻存的细胞进行测定，避免使酶活性下降。
5.轻度溶血样本对GSH测定无影响。
6.全血GSH与吸烟和锻炼成正比。 与乙醇节制程度成反比。成年人全血GSH的参考区间为1.02±0.17mmol/L
7.测定各孔时，各孔温度均需达到室温或25℃，否则影响结果。
8.测定时建议使用412nm，亦可选用405~425nm；
9.动物样品不能立即测定，应先加入GSH提取液匀浆处理，沉淀后去除蛋白质，防止蛋白质所含巯基及相关酶对测定结果产生影响。处理后的提取液可放低温冰箱-70℃保存，10天内有效。
10.为了您的安全和nm健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2.建议第一次测定时先做2-3个样品的本底对照（空白对照），如果样本空白对照与空白管非常接近，则说明样品液中不存在干扰物质，可以不再检测样本本底对照；如果样品空白对照与空白管有显著差异，则在测定每个样本时都需要做样本的空白对照；
3.GSH比较稳定，血液样本以ACD抗凝后冰箱4℃保存，3周内稳定。
4.请尽量使用新鲜的细胞进行测定，而不要使用冻存的细胞进行测定，避免使酶活性下降。
5.轻度溶血样本对GSH测定无影响。
6.全血GSH与吸烟和锻炼成正比。 与乙醇节制程度成反比。成年人全血GSH的参考区间为1.02±0.17mmol/L
7.测定各孔时，各孔温度均需达到室温或25℃，否则影响结果。
8.测定时建议使用412nm，亦可选用405~425nm；
9.动物样品不能立即测定，应先加入GSH提取液匀浆处理，沉淀后去除蛋白质，防止蛋白质所含巯基及相关酶对测定结果产生影响。处理后的提取液可放低温冰箱-70℃保存，10天内有效。
10.为了您的安全和nm健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
1. 配制GSH提取液（1x）：
取一份GSH提取液（3X）加入2份纯水，混匀即可；
2. 配制DTNB显色液：量取50mlDTNB稀释液加入80mgDTNB粉末中，充分溶解即为DTNB显色液；也可使用精密天平称取DTNB粉末，配制成终浓度为1.6%的DTNB显色液；配置好的DTNB显色液2-8℃保存，有效期一个月。最好现配现用。
3. 配制GSH标准储存液并制作标准曲线：
将GSH标准（1mM）用纯水稀释成0.1mM的GSH标准溶液，即GSH标准（100uM），然后按下表一次加入纯水，GSH检测缓冲液和DTNB显色液，混匀，25℃保温反应10min。以0号管调零，用分光光度计412nm测定各管的吸光度值，以GSH的浓度（uM）为横坐标，以吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
4. 样品准备：
a) 红细胞或血浆样品的制备：
请尽量使用新鲜的血液进行测定。
600r/min离心10分钟，沉淀为红细胞，上清为血浆。
对于红细胞，用PBS洗涤两次。取约50ul红细胞沉淀或血浆，加入50ulGSH提取液（1x），充分Vortex振匀。冰浴放置30min，4℃，12000r/min离心20min，取上清用于还原型谷胱甘肽(GSH)测定。
处理好的红细胞样品最后需用GSH提取液（1x）稀释10倍后进行后续的检测；
对于血浆样品，应直接取样进行检测。
b) 动物组织样品的制备：
称取0.2g样本于研钵中，加入1ml经4℃预冷的GSH提取液（1x），冰浴条件下研磨匀浆后， 4℃，12000r/min 离心20min，取上清用于还原型谷胱甘肽(GSH)测定。 并记录上清液的总体积。也可以用液氮研磨匀浆。
c) 细胞样品的制备：
PBS洗涤细胞1次，离心收集细胞，吸尽上清。加入细胞沉淀3倍体积的GSH提取液（1x），充分Vortex振匀。(收集细胞前后分别对离心管进行称重，从而就可以计算出细胞沉淀的重量，10mg细胞沉淀的体积可以粗略地看做10ul。)对样品进行快速的冻融后，4℃或冰上孵育5分钟。4℃，12000r/min 离心20min，取上清用于还原型谷胱甘肽(GSH)测定。
5. GSH加样操作：
取5ml一次性离心管，按照下表依次加入试剂，混匀并注意避免产生气泡。25℃保温反应10min。1cm比色杯，以空白孔调零，用分光光度计412nm测定各管的吸光度值。
如果样品中的GSH浓度过高，可减少样品用量或者用GSH提取液（1x）适当稀释后再进行测定。
6．计算：
根据还原型谷胱甘肽（GSH）标准曲线和样品的吸光度值（样品测定孔吸光值-空白对照吸光值），可计算出样品中GSH的浓度（umol/L）和含量（umol/g）
组织细胞样品GSH（umol/g）=C x VT x N /W
式中：
C为从标准曲线上查得的GSH浓度（umol/L）
VT为提取液的总体积（L）
W为样品的质量（g）
N为稀释倍数
取一份GSH提取液（3X）加入2份纯水，混匀即可；
2. 配制DTNB显色液：量取50mlDTNB稀释液加入80mgDTNB粉末中，充分溶解即为DTNB显色液；也可使用精密天平称取DTNB粉末，配制成终浓度为1.6%的DTNB显色液；配置好的DTNB显色液2-8℃保存，有效期一个月。最好现配现用。
3. 配制GSH标准储存液并制作标准曲线：
将GSH标准（1mM）用纯水稀释成0.1mM的GSH标准溶液，即GSH标准（100uM），然后按下表一次加入纯水，GSH检测缓冲液和DTNB显色液，混匀，25℃保温反应10min。以0号管调零，用分光光度计412nm测定各管的吸光度值，以GSH的浓度（uM）为横坐标，以吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
4. 样品准备：
a) 红细胞或血浆样品的制备：
请尽量使用新鲜的血液进行测定。
600r/min离心10分钟，沉淀为红细胞，上清为血浆。
对于红细胞，用PBS洗涤两次。取约50ul红细胞沉淀或血浆，加入50ulGSH提取液（1x），充分Vortex振匀。冰浴放置30min，4℃，12000r/min离心20min，取上清用于还原型谷胱甘肽(GSH)测定。
处理好的红细胞样品最后需用GSH提取液（1x）稀释10倍后进行后续的检测；
对于血浆样品，应直接取样进行检测。
b) 动物组织样品的制备：
称取0.2g样本于研钵中，加入1ml经4℃预冷的GSH提取液（1x），冰浴条件下研磨匀浆后， 4℃，12000r/min 离心20min，取上清用于还原型谷胱甘肽(GSH)测定。 并记录上清液的总体积。也可以用液氮研磨匀浆。
c) 细胞样品的制备：
PBS洗涤细胞1次，离心收集细胞，吸尽上清。加入细胞沉淀3倍体积的GSH提取液（1x），充分Vortex振匀。(收集细胞前后分别对离心管进行称重，从而就可以计算出细胞沉淀的重量，10mg细胞沉淀的体积可以粗略地看做10ul。)对样品进行快速的冻融后，4℃或冰上孵育5分钟。4℃，12000r/min 离心20min，取上清用于还原型谷胱甘肽(GSH)测定。
5. GSH加样操作：
取5ml一次性离心管，按照下表依次加入试剂，混匀并注意避免产生气泡。25℃保温反应10min。1cm比色杯，以空白孔调零，用分光光度计412nm测定各管的吸光度值。
如果样品中的GSH浓度过高，可减少样品用量或者用GSH提取液（1x）适当稀释后再进行测定。
6．计算：
根据还原型谷胱甘肽（GSH）标准曲线和样品的吸光度值（样品测定孔吸光值-空白对照吸光值），可计算出样品中GSH的浓度（umol/L）和含量（umol/g）
组织细胞样品GSH（umol/g）=C x VT x N /W
式中：
C为从标准曲线上查得的GSH浓度（umol/L）
VT为提取液的总体积（L）
W为样品的质量（g）
N为稀释倍数
参考文献
1.Xiaobin Li et al.
Astaxanthin reduces type 2 diabetic‑associated cognitive decline in rats via activation of PI3K/Akt and attenuation of oxidative stress
Molecular Medicine Reports 2015
Astaxanthin reduces type 2 diabetic‑associated cognitive decline in rats via activation of PI3K/Akt and attenuation of oxidative stress
Molecular Medicine Reports 2015
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