丙二醛(MDA)检测试剂盒

BB-47093
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  • 50T
  • 100T
价格
  • ¥390元
  • ¥580元
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产品概述 product description

机体通过酶系统与非酶系统产生氧自由基,后者能攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸(polyunsaturated fatty acid, PUFA),引发脂质过氧化作用,并因此形成脂质过氧化物。如:醛基(丙二醛MDA)、酮基、羟基、羰基、氢过氧基或内过氧基,以及新的氧自由基等。脂质过氧化作用不仅把活性氧转化成活性化学剂,即非自由基性的脂类分解产物,而且通过链式或链式支链反应,放大活性氧的作用。因此,初始的一个活性氧能导致很多脂类分解产物的形成,这些分解产物中,一些是无害的,另一些则能引起细胞代谢及功能障碍,甚至死亡。氧自由基不但通过生物膜中多不饱和脂肪酸(PUFA)的过氧化引起细胞损伤,而且还能通过脂氢过氧化物的分解产物引起细胞损伤。因而测试MDA的量常常可反映机体内脂质过氧化的程度,间接地反映出细胞损伤的程度。MDA的测定常常与SOD的测定相互配合,SOD活力的高低间接反应了机体清除氧自由基的能力,而MDA的高低又间接反应了机体细胞受自由基攻击的严重程度。 贝博TM BBcellProbe® 丙二醛(MDA)检测试剂盒(TBA比色法,MDA Assay Kit)又称脂质氧化(MDA)检测试剂盒,是采用一种基于MDA和硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid, TBA)反应产生红色产物的显色反应,广泛用于脂质氧化(lipid peroxidation)水平检测。丙二醛在较高温度及酸性环境中可与TBA发生反应,形成红色的MDA-TBA加合物,MDA-TBA加合物在535nm处有最大吸收,据此可以通过比色法进行检测。 贝博TM BBcellProbe® MDA试剂盒是一种改进型的微量、快速、简便、准确、无毒害的测试方法。通过测试可反映出细胞、细胞培养上清、血清、血浆、乳汁等细胞外液、红细胞、白细胞以及各种动植物的细胞水平的脂质过氧化物的量。 本试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。 贝博TM BBcellProbe® 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。 贝博TM BBcellProbe® 可以为您提供各种颜色的BBcellProbeTM M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品,以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。

保存温度
2-8℃ 避光
注意事项
开盖后组份按要求条件保存。
有效期
一年
检测方法
分光光度计
适用样本
血清血浆/组织/细胞
产品特点
1.本试剂盒中试剂均无刺激性气味,对操作人员无任何毒害。
2.快速准确,操作简便,每小时可测100例以上样本。
3.灵敏度高,血清或血浆样品只需0.1 ml,或者更少。
4.再现性好,变异系数CV=1.5%,同一份标本数次测试结果相关极微。
5.呈色稳定,呈色后一天内测吸光度不变。
6.血清样品放置4℃,3~5天内测试结果不变。—20℃以下可保存3个月至半年。
7.测试面广,可测血清、血浆、各种组织匀浆,培养细胞等。
8.不需昂贵与特殊仪器,只需恒温水浴箱或铝锅、铝盆开盖煮沸,及721、722、751、752分光光度计任一型号均可。
9.稳定,不受气温等外界因素的影响。
产品应用
分光光度计
仪器准备
1.分光光度计(酶标仪)
2.恒温水浴锅
3.离心机
4.涡旋混匀器
5.移液器
6.冰盒
试剂准备
1.纯水
2.PBS
3.无水乙醇、冰醋酸
4.蛋白定量试剂盒
耗材准备
1.试管
2.吸头
3.离心管
4.96孔板
使用注意事项
1.必须使用干净的试管。
2.配制试剂时要充分混匀,加样或加试剂时要垂直加入试剂中,避免加到管壁。
3.水浴时间和温度必须固定。水浴前要充分混匀;
4.血浆、血清或尿液样品制备后可以直接用于MDA测定。
5.组织或细胞可以使用PBS或裂解液进行匀浆或裂解。对于组织,组织重量占匀浆液或裂解液的比例为10%;对于细胞,每100万细胞使用0.1ml裂解液或匀浆液。匀浆或裂解后,1600g离心10分钟取上清用于后续测定。匀浆或裂解等样品制备步骤宜在冰浴或4℃进行操作。
6.对于组织或细胞样品,样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度,以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的MDA含量。
7.若待测样品吸光度太低,可将95℃水浴时间延长为80分钟。
8.95℃水浴最好用带盖试管,如无带盖试管,可用保鲜膜扎口,水浴时用针扎一小孔。
9.试剂A温度低时会凝固,使用前水浴加热溶解至透明方可使用。
10.测定样品吸光度值较低时,可将水浴延长至80min,但应同时延长,以免造成批间差异。
11.离心沉淀一样要充分,否则会影响吸光度,造成结果不稳定;这种情况可增加离心转速(3000转/分以上)或者延长离心时间使沉淀完全;
12.天冷时,若发现测试溶液呈雾状可以轻轻放水浴箱稍稍加温,待溶液溶解呈透明状用移液器吸取放入比色杯中;若仍然呈雾状,则考虑为高脂血症;
使用方法
标准操作法
适用样本:
人及各种动植物的样本(包括血清、动植物组织及体液、细胞和细胞培养液等)

试剂准备
试剂B工作液:用前将试剂B 6ml加入170ml纯水混匀,4℃保存。

试剂C工作液:用前将试剂C粉剂溶于30ml热纯水中(90~100℃),混匀(在溶解过程中可适当加热),充分溶解后用纯水补足至30ml再加入30ml冰醋酸,混匀后避光冷藏。

参考取样量:
血清(浆)取0.1-0.2ml;
低密度脂蛋白悬液取0.1~0.2 ml。
肝组织、心肌、肌肉组织、螺旋藻等,取5%或10%匀浆0.1~0.2 ml较好。

标准管参考吸光度:
当标准品取样量为0.1ml时,则标准管吸光度减去标准空白管的吸光度为0.065-0.070;
当标准品取样量为0.2ml时,则标准管吸光度减去标准空白管的吸光度为0.130-0.140;




简易操作方法

适用范围:如果样本数量很多,可以采用以下简易操作方法
人及各种动植物的样本(包括血清、动植物组织及体液、细胞和细胞培养液等)

1. 试剂的配制:
工作液Ⅰ的配制: 试剂A:试剂B工作液:试剂C工作液=X:3:1,现用现配;
工作液Ⅱ的配制: 试剂A:试剂B工作液:50%冰醋酸=X:3:1,现用现配;

微量操作方法
适用范围:
对于MDA含量很低或样本量少的样本可用微量操作方法;
例如小鼠血清(浆),小儿血清(浆),小鼠肺组织、皮肤组织、肾组织、视网膜、细胞及细胞培养液等可用下列方法检测:

样本的前处理:
组织匀浆可制备成10%或5%的匀浆;
注意样本量少,做好的组织匀浆最好不要离心,例如培养的细胞等破碎后可以不离心,取样时注意要摇匀后立即取样;

试剂的配制:
试剂C工作液:
1. 试剂C粉剂溶于30ml热纯水中(90~100℃),混匀(在溶解过程中可适当加热),充分溶解后用纯水补足至30ml再加入30ml冰醋酸,混匀后避光冷藏。
2. 将上述配置好的试剂C溶液用50%冰醋酸按2:1进行稀释,现配现用;配好后的试剂可冰箱冷藏。
【注】:
 50%冰醋酸是50ml纯水加50ml冰醋酸混合而成。
标准管参考吸光度:
当标准品取样量为当标准品取样量为0.1ml时,则标准管吸光度减去标准空白管的吸光度为0.103-0.112
当标准品取样量为0.2ml时,则标准管吸光度减去标准空白管的吸光度为0.206-0.224;

标准操作、简易操作等样本的计算公式

1.血清(浆)中MDA含量的计算公式:
血清中MDA含量(nmol/ml)=(测定管吸光度-测定空白管吸光度)÷(标准管吸光度-标准空白管吸光度)× 标准品浓度10nmol/ml × 样品测试前的稀释倍数

2.组织中MDA含量的计算公式:
组织细胞中MDA含量(nmol/mgprot)=(测定管吸光度-测定空白管吸光度)÷(标准管吸光度-标准空白管吸光度)×标准品浓度10nmol/ml ÷ 样品蛋白浓度(mgprot/ml)

参考值:
1:99的人的红细胞溶血液6.38±0.072 nmol/ml,人血清(浆)4.06±0.6 nmol/ml;
10%大鼠脑匀浆4.72 ±1.44 nmol/mgprot,10%大鼠肾匀浆2.70±0.46 nmol/ mgprot;
10%大鼠肺匀浆1.65 ±0.44 nmol/mgprot,10%大鼠心肌匀浆1.63±0.36 nmol/ mgprot;
10%小鼠脑匀浆16.3 ±5.04nmol/mgprot,5%小鼠心肌匀浆14.64±2.68 nmol/ mgprot;
10%小鼠肌肉匀浆51.59±11.08nmol/mgprot,10%小鼠肝匀浆8.26±2.75 nmol/ mgprot;
小鼠血清(浆)5.30±0.73 nmol/ml;

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