活性氮(RNS)检测试剂盒-绿色荧光

BB-470567
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产品概述 product description

贝博® BBoxiProbe® 活性氮检测试剂盒是一种利用荧光探针BBoxiProbe® O52进行活性氮检测的试剂盒。BBoxiProbe® O52探针本身荧光很弱,可以自由穿过细胞膜,进入细胞内后,可以被细胞内的酯酶水解生成O52D。而O52D不能通透细胞膜,从而使探针很容易被标记到细胞内。 在活性氮存在的条件下,O52D与活性氮反应生成强荧光物质O52F,O52F发出的绿色荧光强度与细胞内活性氮水平成正比,检测O52F的荧光强度就可以知道细胞内活性氮的水平。 O52F的荧光最大激发波长是490 nm,最大发射波长是516 nm。 在激发波长488 nm,发射波长516 nm附近,使用激光共聚焦显微镜、荧光显微镜、荧光分光光度计、荧光酶标仪、流式细胞仪等检测O52F 荧光强度,从而测定细胞内活性氮水平。 本试剂盒可以用于各种真核培养细胞的检测。 贝博® BBoxiProbe® 活性氮检测试剂具有高的灵敏度,良好的选择性,短的响应时间,以及可对检测对象在原位进行实时监控和观察等。更重要的是,这种检测技术对细胞内活性氮的内源性分布不产生巨大的外加干扰,从而能最大程度地得到内源性活性氮变化的真实信息。 活性氮(reactive nitrogen species,RNS)是指NO与包括活性氧在内的化合物相互作用,生成一系列包括ONOO•及其质子形式过氧亚硝酸(HOONO)等具有高度氧化活性的自由基和硝基类化合物,这些与活性氧相对应的以NO为中心的衍生物称为活性氮。活性氮主要包括氮氧化物一氧化氮(NO)和二氧化氮(NO2)、过氧化亚硝酰阴离子(ONOO•)、亚硝酰氢(HNO)、亚硝酸根离子(NO2-)和氨等。 BBoxiProbe® O系列活性氮探针具有多种颜色可以选择,可根据情况对样品进行多色标记实验。除了本试剂盒的绿色荧光探针,贝博还可以提供蓝色、红色、深红色荧光的活性氮检测试剂盒。 贝博® BBoxiProbe® 可以为您提供各种细胞样本、切片样本、组织样本的活性氧、活性氮检测试剂盒产品。 贝博® BBoxiProbe® 可以为您提供总活性氧、总活性氮和各种亚型的活性氧/活性氮的检测试剂盒产品。 贝博® BBoxiProbe® 可以为您提供各种绿色、红色、蓝色、深红色的活性氧/活性氮检测试剂盒产品。 贝博® BBcellProbe® 可以提供各种细胞分析试剂盒。包括细胞凋亡、活性、增殖、毒性、活性氧、周期、细胞代谢、氧化应激、膜流动性、膜电位、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、胞外酸化、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种细胞检测试剂盒产品。 贝博® BBcellProbe® 可以为您提供各种细胞成像、细胞示踪与追踪试剂盒产品。包括各种颜色的BBcellProbe® M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品,以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。

保存温度
-20℃ 避光
注意事项
1.避免反复冻融。
2.可以根据需要分装后冻存。
3.探针为DMSO溶液,在2-8℃时是固体状态,冬季气温较低时为凝固状态,极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解,从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
有效期
1年
检测方法
1.流式细胞仪2.荧光显微镜3.激光共聚焦
适用样本
1.悬浮细胞
2.贴壁细胞
产品特点
1.使用方便:可用激光共聚焦显微镜直接观察、荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测;
2.背景低,灵敏度高;
3.线性范围宽,使用方便。
仪器准备
1.激光共聚焦显微镜或荧光分光光度计或酶标仪或流式细胞仪,
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
试剂准备
PBS缓冲液或者HBSS
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
4.荧光检测专用黑色96孔板
使用注意事项
1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体收集至管底,避免开盖时液体洒落。
2.荧光探针标记后,一定要洗净残余的未进入细胞内的探针,否则会导致背景较高。
3.探针标记完毕并洗净残余探针后,可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描,以确认探针的标记情况是否正常。
4.尽量缩短探针标记后到测定所用的时间,以减少各种可能的误差。
5.O52染色液为DMSO溶液,冬季气温较低时在室温时为凝固状态,极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解,吸头也需要放在培养箱预热,否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
6.使用前,先将本品取出回温至室温,并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。
7.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
8.标记的条件因细胞种类而异,根据不同样本的实际染色结果做相应调整,在每次实验前,请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化,确定最佳条件。以下方法仅供参考。
9.酚红对O52荧光探针的检测有干扰,需避免。
10.染色后立即进行分析。
11.以下步骤仅做为参考,稀释比例和孵育时间可根据实际情况来调整。比如,对于某些细胞,如果发现未被刺激的阴性对照细胞荧光也比较强,可降低探针浓度。如果发现用感兴趣的药物刺激后荧光较弱,可升高O52探针浓度,以提高检测的灵敏度。另外,探针装载的时间也可以根据情况在15-60分钟内适当进行调整,孵育温度在4℃-37℃内调整。
12.必须使用荧光检测专用的黑色96孔板。

使用方法

探针染色工作液配制:
根据样本数量,用HBSS将BBoxiProbe® O52荧光染料100倍稀释,配制成染色工作液。

细胞探针标记
原位标记:仅适用于贴壁培养细胞。
1、 培养板/培养皿准备细胞样本。
2、 待细胞生长到合适丰度,去除细胞培养基,用PBS洗细胞一次。
3、 加入适量体积37℃预热的含O52探针工作液。
4、 在37℃细胞培养箱内于生长状态下避光孵育20分钟~40分钟(具体孵育时间需根据细胞类型而定,需预实验优化)。
5、 移除染色液,用PBS(pH7.4)洗涤细胞3次。以充分去除未进入细胞内的O52探针。
6、 加入200 μl HBSS缓冲液。
7、 荧光酶标仪、荧光显微镜(含合适滤片)检测。最大激发/发射波长为488 nm / 516 nm。

收集后标记:悬浮细胞或贴壁细胞消化处理
1. 离心,吸除上清培养基。
2. 用PBS洗细胞一次。
3. 细胞收集后重悬浮于稀释好的37℃预热的O52探针工作液中,细胞浓度为1*106-2*107/毫升。
4. 于生长状态下37℃细胞培养箱内避光孵育20-30分钟(具体时间需根据细胞类型而定,需预实验优化)。每隔3-5分钟颠倒混匀一下,使探针和细胞充分接触。
5. 离心,吸除染色液,加入PBS(pH7.4)重悬细胞,洗涤3次。以充分去除未进入细胞内的O52探针。
6. 用HBSS/PBS/无血清细胞培养基重悬细胞。
7. 用荧光光度计、荧光酶标仪、流式细胞仪检测。
最大激发/发射波长为488 nm / 516 nm。

活性氮检测:
1. 对于原位标记探针的样品可以用荧光酶标仪检测,或者用激光共聚焦显微镜、荧光显微镜,直接拍照分析(需要有相关的荧光强度分析软件)。
2. 或收集细胞后标记探针然后用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测。
3. 对于收集细胞后标记探针的样品可以用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测,用激光共聚焦显微镜直接拍照分析也可以(需要有相关的荧光强度分析软件)。
4. 使用488 nm激发波长,520 nm发射波长,实时或逐时间点检测刺激前后荧光的强弱。
探针O52的荧光光谱和FITC非常相似,可以用FITC的参数设置检测。
5. 荧光强度强,活性氮含量高。
参考文献
1.Mengchao Ding et al.
A NO/ROS/RNS cascaded-releasing nano-platform for gas/PDT/PTT/immunotherapy of tumors†
Biomaterials Science 2021 (IF=6.843)

2.Gang Zhong et al.
Dopamine-melanin nanoparticles scavenge reactive oxygen and nitrogen species and activate autophagy for osteoarthritis therapy
Nanoscale 2019 (IF=7.79)

3.Yingjun Zhou et al.
Respiratory exposure to nano‐TiO2 induces pulmonary toxicity in mice involving reactive free radical‐activated TGF‐β/Smad/p38MAPK/Wnt pathways
Journal of Biomedical Materials Research Part A 2019 (IF=4.396)

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