

贝博® BBoxiProbe® O52真菌活性氮(RNS)检测试剂盒是一种利用荧光探针BBoxiProbe® O52进行活性氮检测的试剂盒。
O52探针可自由透过真菌细胞膜进入细胞内,并被真菌细胞内的RNS氧化,产生绿色荧光物质,并稳定存在于真菌胞内。绿色荧光强度与细胞内活性氮水平成正比,根据真菌细胞中绿色荧光的产生和强弱,可以判断真菌细胞RNS含量的变化情况。
在激发波长488 nm,发射波长526 nm附近,使用荧光分光光度计、荧光酶标仪、荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、流式细胞仪等可以检测荧光强度的设备,可以方便测定荧光情况,从而测定真菌胞内活性氮水平。
本试剂盒可以用于各种丝状真菌(霉菌)细胞的总活性氮的快速定性检测。通过荧光强度的大小来快速确定具体的干预措施(如养分缺失、缺氧、药物处理或遗传基因操控等)如何影响细胞的活性氮变化,活性氮增加的样本荧光强度大。
除了本绿色荧光检测的试剂盒以外,贝博还可以提供红色荧光的检测试剂盒(相关产品:BB-462172)以及真菌培养上清的活性氮检测试剂盒(相关产品:BB-475056)。
贝博® BBoxiProbe® 活性氮检测试剂具有高的灵敏度,良好的选择性,短的响应时间,以及可对检测对象在原位进行实时监控和观察等。更重要的是,这种检测技术对细胞内活性氮的内源性分布不产生巨大的外加干扰,从而能最大程度地得到内源性活性氮变化的真实信息。
一般最好使用新鲜真菌样本检测活性氮。冻存的真菌样本的RNS在长期冻存过程中可能会损失掉,有条件的话不建议使用冻存的真菌样本。已经冻存的真菌样本中残余的RNS可以用本试剂盒检测。
BBoxiProbe® O系列活性氮探针具有多种颜色可以选择,可根据情况对样品进行多色标记实验。除了本试剂盒的绿色荧光探针,贝博® 还可以提供红色、蓝色、深红色荧光的活性氧检测试剂盒。
活性氮(reactive nitrogen species,RNS)是指NO与包括活性氧在内的化合物相互作用,生成一系列包括ONOO·及其质子形式过氧亚硝酸(HOONO)等具有高度氧化活性的自由基和硝基类化合物,这些与活性氧相对应的以NO为中心的衍生物称为活性氮。活性氮主要包括氮氧化物一氧化氮(NO)和二氧化氮(NO2)、过氧化亚硝酰阴离子(ONOO·)、亚硝酰氢(HNO)、亚硝酸根离子(NO2-)和氨等。
贝博® BBoxiProbe® 可以为您提供各种细胞样本、切片样本、组织样本的活性氧、活性氮检测试剂盒产品。
贝博® BBoxiProbe® 可以为您提供总活性氧、总活性氮和各种亚型的活性氧/活性氮的检测试剂盒产品。
贝博® BBoxiProbe® 可以为您提供各种绿色、红色、蓝色、深红色的活性氧/活性氮检测试剂盒产品。
2. 长期不用-20℃保存。避免反复冻融。可以根据需要分装后冻存。
3. 染色液A为DMSO溶液,冬季气温较低时为凝固状态,极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
4. 可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热,否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
5. 试剂拆封后请尽快使用完!
2. 流式细胞仪
3. 荧光显微镜
4. 激光共聚焦
2. 冻存真菌样本
2. 背景低,灵敏度高;
3. 线性范围宽,使用方便。
激发波长488 nm,发射波长526 nm。
2. 离心机
3. 移液器
4. 冰箱
5. 冰盒
2. 吸头
3. 一次性手套
4. 荧光专用黑色96孔板
2. 荧光探针标记后,一定要洗净残余的未进入细胞内的探针,否则会导致背景较高。
3. 探针标记完毕并洗净残余探针后,可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描,以确认探针的标记情况是否正常。
4. 尽量缩短探针标记后到测定所用的时间,以减少各种可能的误差。
5. O52在光照和空气中易被氧化,注意避光密封保存。
6. 对不同的真菌样本,应选择合适的孵育时间和浓度,以观察RNS的变化。应根据预实验情况调整染色浓度和时间。
1. 根据样本数量,用纯水将探针稀释液B进行10倍稀释。
2. 根据样本数量,用10倍稀释过的探针稀释液B将探针进行1000倍稀释。即配成染色工作液。
O52探针标记:
1. 准备新鲜待测真菌样本(菌丝或孢子)。
2. 用PBS洗涤菌体2-3次。离心收集菌体沉淀。
3. 用500 μl-1 ml染色工作液重悬菌体。
4. 在37℃避光孵育30分钟。
5. 孵育结束后,离心收集菌体。
6. 用PBS清洗细胞一次。离心收集菌体。
7. 用500 μl PBS重悬菌体。充分混匀。
8. 取200 μl加入荧光检测用96孔板。
9. 置于酶标仪中,后于激发波长为488 nm、发射波长526 nm检测荧光强度。
结果处理:
荧光强度强表示真菌活性氮强度高。
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