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产品概述
product description
贝博® BBcellProbe® OM09线粒体ROS检测试剂盒是利用贝博® BBcellProbe® OM系列探针进行线粒体ROS特异性染色的试剂盒。本试剂盒中的BBcellProbe® OM09线粒体ROS染色探针为绿色荧光标记的线粒体探针，具有488 / 510 nm的最大激发/发射波长。
贝博® BBcellProbe® OM09线粒体ROS染色探针是一种细胞渗透型的对活细胞中的线粒体体进行选择性染色的一类新型荧光染料，该探针可以选择性标记线粒体，包含标记线粒体的弱巯基反应性的氯甲基官能团。只需简单孵育细胞，即可穿过细胞膜并直接聚集在活性线粒体上。一旦进入线粒体后，快速被ROS氧化，并产生绿色荧光。BBcellProbe® OM09线粒体ROS染色探针只可被ROS氧化，而不被其他部位活性氧类(ROS)和活性氮类(RNS)氧化。
保存温度
-20℃ 避光保存。
注意事项
1.染料长期不用-20℃保存。
2.试剂拆封后请尽快使用完！
2.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
6个月
检测方法
1.激光共聚焦/荧光显微镜
2.流式细胞仪
2.流式细胞仪
适用样本
1.悬浮细胞2.贴壁细胞
产品应用
1.激光共聚焦/荧光显微镜
2.流式细胞仪
2.流式细胞仪
仪器准备
1. 激光共聚焦或流式细胞仪微镜/荧光分光光度计或酶标仪，
2. 离心机
3. 移液器
4. 冰箱
5. 冰盒
2. 离心机
3. 移液器
4. 冰箱
5. 冰盒
试剂准备
1. 无水DMF（CAS号：68-12-2）
2. PBS缓冲液
3. HBSS
2. PBS缓冲液
3. HBSS
耗材准备
1. 离心管
2. 吸头
3. 一次性手套
2. 吸头
3. 一次性手套
使用注意事项
1. 预实验很重要。必须要做预实验，在正式实验之前取少量样本优化实验条件，并像正式样本一样认真进行，看实验结果是否可行，实验条件是否适合自己的样本。由于生物样本的多样性，不同样本的实验条件通常差异较大，同种细胞的不同模型下需要的实验条件也可能不同，为了避免浪费正式样本和试剂，一定要提前预实验优化实验条件。
2. 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体损失导致试剂量不够用。
3. 细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。离心力在不损失细胞的前提下尽可能小，重悬细胞是动作要轻柔，避免多次反复的激烈吹打。不用涡旋振荡器。
4. 标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化，确定最佳条件。以下方法仅供参考。
5. 染色后立即进行分析。
2. 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体损失导致试剂量不够用。
3. 细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。离心力在不损失细胞的前提下尽可能小，重悬细胞是动作要轻柔，避免多次反复的激烈吹打。不用涡旋振荡器。
4. 标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化，确定最佳条件。以下方法仅供参考。
5. 染色后立即进行分析。
使用方法
1. 染色母液配制：
小包装试剂盒（BB-46092-50T）的探针管中加入10 μl无水DMF，充分溶解。
大包装试剂盒（BB-46092-100T）的探针管中加入20 μl无水DMF，充分溶解。
2. 染色工作液配制：
根据样本数量，用探针稀释液将BBcellProbe® OM09荧光染料母液10倍稀释，再用HBSS缓冲液或者其他缓冲液50-100倍稀释，配制成染色工作液。
3. 细胞染色
2.1 对于贴壁细胞
1）培养板/培养皿准备细胞样本。
2）待细胞生长到合适丰度，吸除培养液，用PBS洗涤细胞加入100 μl 37℃预热的含探针染色工作液。于生长状态下避光37℃孵育30分钟～60分钟（具体孵育时间需根据细胞类型而定，需预实验优化）。
3）利用HBSS替换上述染色液。
4）激光共聚焦显微镜、荧光显微镜（含合适滤片）下观察或荧光酶标仪检测。最大激发/发射波长为488 / 510 nm。
2.2 对于悬浮细胞
1）离心细胞，吸除上清。
2）利用37℃预热的探针工作液重悬细胞，于生长状态下避光孵育30分钟～60分钟（具体时间需根据细胞类型而定，需预实验优化）。
3）离心，吸除染色液，加入HBSS重悬细胞。
4）置于激光共聚焦/荧光显微镜镜下观察。或流式细胞仪、荧光酶标仪检测。最大激发/发射波长为488 / 510 nm。
激光共聚焦显微镜检测：
1. 对贴壁生长细胞或活组织，可直接在荧光显微镜下观察；对悬浮生长细胞，取25-50 μl细胞悬液滴到一张显微载玻片上，再盖上一张盖玻片。
2. 荧光显微镜下，用488 nm激发，观察和拍摄细胞510 nm发射图像，ROS阳性细胞被染成绿色。
流式细胞仪分析：
1. 对贴壁生长细胞，用胰酶消化制备成单细胞悬液；对悬浮生长细胞，直接收集细胞。用0.5~1 ml冰冷PBS重悬细胞（5~10万）。
2. 采用488 nm波长激发，测定510 nm的发射。
小包装试剂盒（BB-46092-50T）的探针管中加入10 μl无水DMF，充分溶解。
大包装试剂盒（BB-46092-100T）的探针管中加入20 μl无水DMF，充分溶解。
2. 染色工作液配制：
根据样本数量，用探针稀释液将BBcellProbe® OM09荧光染料母液10倍稀释，再用HBSS缓冲液或者其他缓冲液50-100倍稀释，配制成染色工作液。
3. 细胞染色
2.1 对于贴壁细胞
1）培养板/培养皿准备细胞样本。
2）待细胞生长到合适丰度，吸除培养液，用PBS洗涤细胞加入100 μl 37℃预热的含探针染色工作液。于生长状态下避光37℃孵育30分钟～60分钟（具体孵育时间需根据细胞类型而定，需预实验优化）。
3）利用HBSS替换上述染色液。
4）激光共聚焦显微镜、荧光显微镜（含合适滤片）下观察或荧光酶标仪检测。最大激发/发射波长为488 / 510 nm。
2.2 对于悬浮细胞
1）离心细胞，吸除上清。
2）利用37℃预热的探针工作液重悬细胞，于生长状态下避光孵育30分钟～60分钟（具体时间需根据细胞类型而定，需预实验优化）。
3）离心，吸除染色液，加入HBSS重悬细胞。
4）置于激光共聚焦/荧光显微镜镜下观察。或流式细胞仪、荧光酶标仪检测。最大激发/发射波长为488 / 510 nm。
激光共聚焦显微镜检测：
1. 对贴壁生长细胞或活组织，可直接在荧光显微镜下观察；对悬浮生长细胞，取25-50 μl细胞悬液滴到一张显微载玻片上，再盖上一张盖玻片。
2. 荧光显微镜下，用488 nm激发，观察和拍摄细胞510 nm发射图像，ROS阳性细胞被染成绿色。
流式细胞仪分析：
1. 对贴壁生长细胞，用胰酶消化制备成单细胞悬液；对悬浮生长细胞，直接收集细胞。用0.5~1 ml冰冷PBS重悬细胞（5~10万）。
2. 采用488 nm波长激发，测定510 nm的发射。
参考文献
1. Wei Li et al.
Cuprous oxide nanocomposites with photothermal (PTT) and chemical dynamics (CDT) effects induce cuproptosis in breast cancer using the strategy of increasing inflow and reducing outflow
Nano Today 2024 （IF 20.722）
2. Jianxia Zhou et al.
L-Serine enables reducing the virulence of Acinetobacter baumannii and modulating the SIRT1 pathway to eliminate the pathogen
Microbiology Spectrum 2024 （IF 9.043）
3. Ziyou Lin et al.
Metabolic Reprogramming Driven by IGF2BP3 Promotes Acquired Resistance to EGFR Inhibitors in Non–Small Cell Lung Cancer
Cancer Research 2023 （IF 13.312）
4. Zhuoyan Zai et al.
Estrogen antagonizes ASIC1a-induced chondrocyte mitochondrial stress in rheumatoid arthritis
Journal of Translational Medicine 2022 （IF 8.440）
Cuprous oxide nanocomposites with photothermal (PTT) and chemical dynamics (CDT) effects induce cuproptosis in breast cancer using the strategy of increasing inflow and reducing outflow
Nano Today 2024 （IF 20.722）
2. Jianxia Zhou et al.
L-Serine enables reducing the virulence of Acinetobacter baumannii and modulating the SIRT1 pathway to eliminate the pathogen
Microbiology Spectrum 2024 （IF 9.043）
3. Ziyou Lin et al.
Metabolic Reprogramming Driven by IGF2BP3 Promotes Acquired Resistance to EGFR Inhibitors in Non–Small Cell Lung Cancer
Cancer Research 2023 （IF 13.312）
4. Zhuoyan Zai et al.
Estrogen antagonizes ASIC1a-induced chondrocyte mitochondrial stress in rheumatoid arthritis
Journal of Translational Medicine 2022 （IF 8.440）
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