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产品概述
product description
贝博® BBoxiProbe® 组织切片活性氧检测试剂盒是一种利用荧光探针BBoxiProbe® O19进行活性氧检测的试剂盒。
BBoxiProbe® O19是一种细胞膜通透性的荧光探针，被活性氧特异性氧化生成深红色荧光物质，深红色荧光强度与活性氧水平成正比，检测深红色荧光强度就可以知道组织切片内活性氧的水平。
在激发波长658 nm，发射波长676nm附近，使用荧光显微镜/激光共聚焦检测深红色荧光强度，从而测定样本内活性氧水平。利用本试剂盒可以快速定性检测样本内活性氧水平变化差异。
保存温度
-20℃ 避光
注意事项
1.染料长期不用可以-20℃保存。避免反复冻融。
2.染色液A为DMSO溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
4.试剂拆封后请尽快使用完！
2.染色液A为DMSO溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
4.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
6个月
检测方法
1.激光共聚焦显微镜 2.荧光显微镜
适用样本
1.新鲜冰冻切片 2.振动切片 3.石蜡切片
产品特点
1.使用方便：可用荧光显微镜直接拍照分析；
2.背景低，灵敏度高；
3.线性范围宽，使用方便。
2.背景低，灵敏度高；
3.线性范围宽，使用方便。
产品应用
1.激光共聚焦显微镜
2.荧光显微镜
2.荧光显微镜
仪器准备
1.激光共聚焦显微镜/荧光显微镜
2.移液器
3.冰箱
4.冰盒
2.移液器
3.冰箱
4.冰盒
试剂准备
PBS 缓冲液或者HBSS
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.玻片
4.一次性手套
2.吸头
3.玻片
4.一次性手套
使用注意事项
1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
2.尽量缩短探针标记后到测定所用的时间，以减少各种可能的误差。
3.冰冻切片制作不需要经过固定脱水包埋等步骤，直接冷冻后切片贴片。
4.有条件也可以采用振动切片的方法。有些方便处理的样品类型也可以采用徒手切片。
5.以下操作步骤仅供参考，请根据实际样本情况调整
2.尽量缩短探针标记后到测定所用的时间，以减少各种可能的误差。
3.冰冻切片制作不需要经过固定脱水包埋等步骤，直接冷冻后切片贴片。
4.有条件也可以采用振动切片的方法。有些方便处理的样品类型也可以采用徒手切片。
5.以下操作步骤仅供参考，请根据实际样本情况调整
使用方法
电子版仅供参考，最终以试剂盒的纸质说明书为准！
一、 试剂配制
1. 根据样本数，用纯水将BBoxiProbe® O29活性氧荧光探针200-2000倍稀释，配成染色工作液。
2. 用纯水将10X清洗液10倍稀释，配成1X清洗液工作液。
二、 探针标记
1. 准备待测的厚为10-20 μm的未经固定处理的冰冻切片。
2. 室温下，小心加上200 μl清洗液工作液，铺满整个切片表面，静置3-5分钟。
3. 小心吸除清洗液。
4. 滴加100-200 μl染色工作液，在37℃培养箱避光孵育20-60分钟。
5. 移除染色液。
6. 用PBS洗涤切片2-3次。
7. 加盖玻片或甘油封片。
8. 荧光显微镜检测。
【注】:
染色完成后，立即进行荧光定性分析。
激发波长658 nm，发射波长676 nm。
荧光强，表明活性氧（ROS）含量高。
拍照后，用相应的图像分析软件进行光密度分析。可以用实验中对照样本的荧光强度值为基准，待测组样本的荧光强度值占对照样本的百分比来比较活性氧（ROS）程度差异。
一、 试剂配制
1. 根据样本数，用纯水将BBoxiProbe® O29活性氧荧光探针200-2000倍稀释，配成染色工作液。
2. 用纯水将10X清洗液10倍稀释，配成1X清洗液工作液。
二、 探针标记
1. 准备待测的厚为10-20 μm的未经固定处理的冰冻切片。
2. 室温下，小心加上200 μl清洗液工作液，铺满整个切片表面，静置3-5分钟。
3. 小心吸除清洗液。
4. 滴加100-200 μl染色工作液，在37℃培养箱避光孵育20-60分钟。
5. 移除染色液。
6. 用PBS洗涤切片2-3次。
7. 加盖玻片或甘油封片。
8. 荧光显微镜检测。
【注】:
染色完成后，立即进行荧光定性分析。
激发波长658 nm，发射波长676 nm。
荧光强，表明活性氧（ROS）含量高。
拍照后，用相应的图像分析软件进行光密度分析。可以用实验中对照样本的荧光强度值为基准，待测组样本的荧光强度值占对照样本的百分比来比较活性氧（ROS）程度差异。
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