囊泡提取试剂盒-血清/血浆

BB-45612
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  • 50T
  • 100T
价格
  • ¥1700元
  • ¥2500元
数量
产品概述 product description

贝博® 细胞外囊泡(Extracellular Vesicles)提取试剂盒(细胞培养上清用)适用于从各种原代或传代培养细胞培养上清样品中提取细胞外囊泡。不需要超速离心,仅需通过简单的常规离心即可从样本中获取大量结构完整的囊泡,具有快速简单,提取效率高的特点,可节省更多的实验时间和样本。提取的囊泡可根据实验目的用于后续的多种实验,应用范围广泛。
细胞外囊泡(Extracellular Vesicles, EVs)是指从细胞膜上脱落或者由细胞分泌的双层膜结构的囊泡状小体,直径从40 nm到1000 nm不等。是细胞激活、损伤或凋亡后从细胞膜脱落或者与细胞膜融合后以外分泌的形式释放到细胞外的小囊泡。
细胞外囊泡广泛存在于细胞培养上清以及各种体液(血液、淋巴液、唾液、尿液、精液、乳汁)中,携带有细胞来源相关的多种蛋白质、脂类、DNA、mRNA、miRNA等,并且能够通过生物屏障,在细胞间传递功能性核酸分子,从而发挥各种生物学功能,参与细胞间通讯、细胞迁移、血管新生和免疫调节等过程。
囊泡已经成为细胞间通讯的重要介质,参与原核生物和高等真核生物细胞之间的生物信号传递,以调节不同范围的生物过程。囊泡的病理生理作用开始在包括癌症、感染性疾病和神经变性疾病在内的疾病中得到充分认识,在糖尿病、心血管疾病、艾滋病、慢性炎症疾病以及癌症中都发现细胞外囊泡水平的升高,它们很有可能成为这类疾病的诊断标志物,显现了囊泡作为疾病的早期诊断、治疗干预的潜在新靶点的巨大应用前景。此外,未修饰和工程化的囊泡可能在大分子药物递送中具有应用价值。因此,对细胞外囊泡进行准确的定性和定量研究显得尤为重要。
传统的分离和提取微囊泡的主要方法是超速离心法,这种方法缺点是耗时耗力,往往需要30-70个小时,每次最多只能处理6个样品,需要大量的起始材料,而且产量不高。
贝博® 生物自主开发的囊泡快速提取试剂盒系列产品,可以通过简单离心快速高效获得高纯度囊泡颗粒。本试剂盒提取的囊泡完好无缺,能用于各种功能研究、蛋白分析及RNA分析、电镜分析、NTA粒径分析等下游实验应用。
本试剂盒按每个样本处理2 ml血清/血浆计,每个50 T试剂盒大约可以用于提取100 ml血清/血浆。如果需要处理大量的血清/血浆,将提取液按说明书标准操作的体积等比例调整即可。
贝博® 还可以提供一小时快速提取获得各种样本囊泡的快速提取试剂盒(相关产品:BB-4563)。
贝博® BBproExtra® 可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、藻类、液体、土壤等各种不同样本的蛋白提取试剂盒。
贝博® BBproExtra® 可以提供针对细胞膜、核、胞质、线粒体、溶酶体、高尔基体、内质网、囊泡等细胞不同部位的蛋白提取试剂盒。
贝博® BBproExtra® 可以提供针对下游实验不同应用的试剂盒,例如用于Western Blotting和双向电泳等不同下游应用的试剂盒;含去垢剂成分和不含去污剂成分的蛋白提取试剂盒;专用于蛋白质谱检测、Pull-down实验的试剂盒等总计300多种蛋白提取试剂盒供选择使用。
贝博® BBproExtra® 可以提供针对动物、植物等不同样本的细胞核、线粒体、溶酶体、叶绿体、外泌体等不同细胞器的提取试剂盒。
贝博® BBproExtra® 可以提供蛋白浓缩、脱盐、沉淀、透析、定量、电泳、纯化、检测等不同蛋白样品处理检测等相关试剂盒。
贝博® BBcellProbe® 可以提供各种细胞检测试剂盒。包括细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。
贝博® BBcellProbe® 可以为您提供各种颜色的BBcellProbe® M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品,以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。
贝博® BBcellProbe® 可以提供动物、植物、微生物、酵母、水产、家禽、兽类、土壤等样本的各种生化指标检测的数百种试剂盒产品。

保存温度
2-8℃
注意事项
1.低温有沉淀析出的话可以在37℃短时间水浴溶解,摇匀后使用。
2.试剂拆封后请尽快使用完!
有效期
一年。
适用样本
血清
产品特点
1.使用方便,无需超速离心,省时省力;
2.纯度高,富集量大,应用范围广;
3.获取的结构和功能完整;
4.稳定性好,便于运输,便于保存。
产品应用
功能研究,核酸分析
仪器准备
1.离心机
2.移液器
3.冰箱
4.冰盒
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
1.可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂。
2.以下以2ml血清/血浆为例,实际操作时按血清样本和提取液用量体积比等比例调整使用即可。
3.不同血清/血浆样本囊泡数量差异极大,请根据实际情况选择血清/血浆样本的量,根据下游应用和参考文献确定。条件允许的情况下采用尽可能多的血清/血浆样本。
4.常规的血清/血浆样本最佳上样量为2-4 ml及以上,条件允许的情况下采用尽可能多的血清/血浆样本。
5.已经分离好的囊泡样本如果需要进行电镜观察,只能冰上或4℃保存,存放时间不超过两天,注意不可冷冻保存,否则可能会影响电镜观察效果。
使用方法
1. 收集2 ml待提取的血清/血浆样品,置2-8℃保存。
2. 将样品在4℃条件下,3000×g离心15分钟。弃沉淀,收集上清。
3. 小心将上清移入另一干净离心管中。
4. 将样品在4℃条件下,10000×g离心20分钟。弃沉淀,收集上清。
5. 小心将上清移入另一干净离心管中。
6. 在2 ml血清/血浆样品中加入2 ml提取液A,盖紧离心管盖,上下颠倒混匀1分钟左右,使液体充分混匀。
7. 在4 ml液体样品中加入1 ml提取液B,盖紧离心管盖,上下颠倒混匀1分钟左右,使液体充分混匀。
8. 置2-8℃冰箱静置过夜。
9. 在4℃条件下,10000×g离心60分钟。
10. 小心移除上清,收集沉淀。
11. 取50-100 μl囊泡保存液将沉淀重悬,即得到囊泡样品。
12. 将囊泡样本-80℃保存或直接用于下游应用。
常见问题分析
1.采用血浆(plasma)还是血清(serum)来源的囊泡?
对于大多数涉及到囊泡 RNA分离的研究,我们推荐使用血浆(plasma)。因为血清收集后在凝血过程中,血小板受到刺激会产生许多囊泡和其他形式的小泡,因此血清中获得的小泡始终比血浆中多,甚至超过50%的小泡来源于血小板。所以血浆是研究病理生理状态下囊泡更好的介质。多数的criculating 囊泡研究样本使用的是血浆。负压采血之后,血液首先存放入采血管,去除止血带,最初的几毫升不要,因为有压力激活效应,并且被成纤维细胞污染。血液收集应该轻柔并且迅速。颠倒混匀采血管8-10次,与管壁上的抗凝剂混合,但不要为了抗凝而剧烈摇动。离心前管子应该垂直存放,并记录实验室中存放的时间,因为从采血到离心除去细胞和血小板这中间的过程很重要,建议在30min内完成,长时间的存放,而没有及时处理会导致血小板囊泡的进一步释放。血液要尽快处理,在室温条件下分离血浆(或者血清)。所有样品要使用相同的转速和转子类型离心。

2.怎样选择抗凝剂?
抗凝剂有一个或多个形式的功能,包括螯合钙、蛋白酶抑制和抑制血小板活化。一般选用EDTA抗凝。其它有许多抗凝血剂可用,但不建议使用肝素(heparin)抗凝剂。无论是外源性或内源性起源(例如肥大细胞),肝素会抑制下游PCR反应,因为肝素会与引物和酶竞争与核酸结合。另外,肝素可抑制囊泡与靶细胞的结合,抑制囊泡激活血小板或降低血小板激活阈值。应用肝素治疗的病人也应该注意。 对于珍贵样本,可能需要从肝素化的血液样品中提取RNA。核酸的检测需要通过调整PCR的敏感性。另外如果囊泡相关核酸被发现只存在于囊泡内,在RNA分离之前的洗涤也可以帮助去除肝素。其它抗凝剂如EDTA、氟化钠/草酸钾(NaF/KOx),或柠檬酸三钠[加入/不加右旋糖dextrose(ACD)或茶碱(theophylline)、腺苷(adenosine)和双嘧达莫(CTAD)]就更复杂了,最好根据下游的试验来指导。CTAD阻碍血小板活化和随后的囊泡释放。EDTA可干扰PCR反应(尽管程度低于肝素),但它的存在可能是无害的。另外,下游实验的选择需要考虑到抗凝剂的使用种类。不同的聚合酶对抑制剂有不同的敏感性。

3.采血管的选择方法?
血浆采用紫盖采血管(EDTA-K2 或 EDTA-K3),例如BD货号:367841-2ml 367862-4ml 367863-6ml 366643-10ml 等;血清采用黄盖采血管(促凝管或促凝管带分离胶),例如BD货号:366566-5ml 367985-10ml 等。

4.如何鉴定提取的囊泡?
通常使用透射电镜检测(形态)、粒径检测(大小)、囊泡标志蛋白Western blot检测等方法鉴定提取的囊泡。

5.进行囊泡WB鉴定时有什么内参蛋白可供选择?
没有,该检测属于定性检测。

6.蛋白浓度低?
有些样本囊泡量不够下游应用,在条件允许的情况请尽可能加大血清/血浆的上样量。
处理部分样本时可能没有裂解完全,导致蛋白浓度低。请选择高质量的蛋白裂解液或蛋白提取试剂盒。