2-8℃ 避光保存

1.长期不用可以-20℃保存。
2.染色液避免反复冻融。
3.染色液需要长期保存时可以根据使用情况进行小量分装后-20℃保存。
4.试剂拆封后请尽快使用完！

6个月

1.激光共聚焦
2.荧光显微镜
3.流式细胞仪

1. 悬浮细胞
2. 贴壁细胞

1.激光共聚焦
2.荧光显微镜
3.流式细胞仪

1.激光共聚焦/荧光显微镜
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒

PBS缓冲液 或者HBSS

1.离心管
2.吸头
3.一次性手套

1. 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
2. 细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
3. 染色后立即进行分析。
4. 染色时间根据不同样本的实际染色结果做相应调整。
5. 本染色液可用于培养细胞、细胞涂片、石蜡切片、冰冻切片的检测。石蜡切片用常规方法脱蜡、分化、冰冻切片用冰丙酮固定后检测。
6. 根据样本情况和下游的检测仪器选择合适的染色方法，只要在染色时染色工作液能充分覆盖细胞样本即可。
7. 活细胞原位染色可能需要较长时间，可将染液加入培养基后避光孵育1-2小时，或更长时间。
8. 以下以培养细胞的涂片的荧光显微镜检测为例，细胞染色不需要固定，也可以固定后染色，其他方法请参阅相关资料。

1. 染色工作液的配制：
根据样品数用PBS将HO33258染色液10-100倍稀释，配制成染色工作液。
【注】：
 也可以用HBSS等其它缓冲液或培养基稀释。
 原位染色时可以直接将染色液加入培养基。
2. 细胞涂片的制备：
贴壁细胞，可将盖玻片放于培养器皿中，让培养细胞长于玻片上，然后用药物诱导细胞凋亡后取出，用4%多聚甲醛固定5min。也可其他方式培养后收集细胞制作涂片检测。
对于悬浮细胞，用药物诱导细胞凋亡后，500-1000g离心5分钟收集细胞，用PBS洗2次，收集调整细胞数为1X105/ml，涂片或用离心涂片，用4%多聚甲醛固定5min；
3. 用PBS洗涤涂片两次。
4. 加适量染色工作液于涂片上，室温避光染色5-20分钟。
5. 用PBS洗涤涂片。
6. 用荧光显微镜检测结果。染料-DNA复合物的最大激发波长为350 nm，最大发射波长为461 nm。结果分析 ：
置于荧光显微镜下，选用340-350 nm的激发光观察：
在荧光显微镜下，活细胞呈弥散均匀蓝色荧光，凋亡细胞核或细胞质内可见浓染致密的颗粒块状蓝色荧光。如果见到3个或3个以上的DNA荧光碎片被认为是凋亡细胞。

1.SuJing Song et al.
17β-estradiol attenuates rat articular chondrocyte injury by targeting ASIC1a-mediated apoptosis
Molecular and Cellular Endocrinology 2020

2.Mao Zheng et al.
Daphnetin induces apoptosis in fibroblast-like synoviocytes from collagen-induced arthritic rats mainly via the mitochondrial pathway
Cytokine 2020

3.Kongxi Zhu et al.
Long non-coding RNA MBNL1-AS1 regulates proliferation, migration, and invasion of cancer stem cells in colon cancer by interacting with MYL9 via sponging microRNA-412-3p
Clinics and Research in Hepatology and Gastroenterology 2019

4.Rong Ma et al.
Oxygen and Indocyanine Green loaded microparticles for dual-mode imaging and sonodynamic treatment of cancer cells
Ultrasonics Sonochemistry 2017

5.Shan Liao et al.
The receptor for activated protein kinase C promotes cell growth, invasion and migration in cervical cancer
International Journal of Oncology 2017