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贝博® BBcellProbe® 内质网染色试剂盒是利用BBcellProbe® E系列探针进行内质网特异性染色的试剂盒。本试剂盒中的BBcellProbe® E04内质网染色探针为红色荧光标记的内质网探针，具有586nm/616nm的激发/发射波长。 BBcellProbe® E系列探针是一种细胞渗透型的对活细胞中的内质网体进行选择性染色的一类新型荧光染料，该系列探针可以选择性标记内质网。只需简单孵育细胞，即可穿过细胞膜并直接聚集在活性内质网上。可有效标记活细胞。一旦内质网被染色后，还能根据后续实验的需求进行固定（醛类固定剂如甲醛）和透化（醛类去污剂如Triton X-100），探针依然维持在细胞内。 BBcellProbe® E系列内质网探针具有多种颜色可以选择，可根据情况对样品进行多色标记实验。除了本试剂盒的红色荧光探针，贝博® 还可以提供绿色、蓝色等颜色的染色试剂盒。 贝博® BBcellProbe® 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。 贝博® BBcellProbe® 可以为您提供各种颜色的BBcellProbe® M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品，以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。 贝博® BBcellProbe® 可以提供动物、植物、微生物、酵母、水产、家禽、兽类、土壤等样本的各种生化指标检测的数百种试剂盒产品。
2.试剂拆封后请尽快使用完！
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
2.吸头
3.一次性手套
2.使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。
3.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
4.标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化，确定最佳条件。以下方法仅供参考。
5.最好使用HBSS缓冲液（含Ca2+、Mg2+ Hank’s 平衡盐溶液）稀释该探针进行染色，可得到最佳实验结果。
6.E04染料具有环境敏感性，工作液条件发生改变E04会随之出现极性增强、最大荧光波长偏移到更高波长处、量子产量下降等现象。
7.染色后立即进行分析。
8.操作过程中需要尽量避光。
根据样本数量，用37℃培养箱预热HBSS或PBS或其他缓冲液将BBcellProbe® E04荧光染料500倍稀释。配制成染色工作液。（对于后续需要做固定或透化的样本，200倍稀释）
2. 细胞染色
2.1 对于贴壁细胞
1）培养皿/培养板准备细胞样本。
2）待细胞生长到合适丰度，吸除培养液，用HBSS缓冲液洗涤细胞，加入适量37℃预热的含探针工作液。于生长状态下孵育15分钟～40分钟（具体孵育时间需根据细胞类型而定，需预实验优化）。
3）利用新鲜培养基替换上述染色液。
4）荧光显微镜（含合适滤片）或激光共聚焦显微镜下观察。或者进行后续的固定步骤。
激发/发射波长为586 / 616nm。
2.2 对于悬浮细胞
1）用HBSS洗涤细胞。
2）利用37℃预热的探针工作液重悬细胞，于生长状态下孵育15分钟～40分钟（具体时间需根据细胞类型而定，需预实验优化）。
3）离心，吸除染色液，加入新鲜培养液重悬细胞。
4）置于荧光镜下观察。或激光共聚焦显微镜检测。激发/发射波长为586 / 616nm。
或者进行后续的固定步骤。
已染色细胞固定后，仅部分荧光探针留在细胞内，荧光信号会有部分衰减。
2.固定细胞的方法？
染色后清洗，小心吸走清洗液。换用新鲜配制且预热的含4%甲醛的缓冲液或培养液进行细胞固定。用4%甲醛于37℃固定细胞2min。 细胞固定后，可用合适缓冲液进行清洗，每次5min，共2次。清洗后可对细胞进行后续封片、镜检或进一步染色。
3.可以对细胞进行透化处理吗？
不建议对细胞进行透化处理，因为经Triton X-100或其它透化剂透化后，细胞内将无荧光信号保留。
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