-20℃避光

试剂拆封后请尽快使用完

六个月

荧光显微镜/激光共聚焦

细胞/组织切片

1.荧光显微镜/激光共聚焦；
2.离心机；
3.移液器；
4.冰箱；
5.冰盒

1.PBS缓冲液；
2.纯水

1.离心管；
2.吸头；
3.载玻片和盖玻片；
4.一次性手套

1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体损失导致试剂量不够用。
2.标本应新鲜，且未受其他化学物品污染。
3.应根据组织、细胞类型不同调整通透时间。

试剂配制:
1.Calreticulin 免单抗配制:
根据样本数量，将 Calreticulin 免单抗用 PBS 稀释 50 倍。
抗免 FITC 二抗
根据样本数量，
将抗免 FITC 二抗用 PBS 稀释 50 倍。
核蓝色复染液
根据样本数量，用 PBS 稀释 50 倍。
贴壁细胞:
1.吸除培养液，用 PBS 洗涤1次。
2.加入固定液，固定 5-15 分钟。固定液的用量充分盖住样品即可，对于6孔板中的样品，
通常每孔加入 lml 固定液。对于 96 孔板中的样品，通常每孔加入 100μl固定液，其它
多孔板的用量可以适当参考执行，后续以6孔板为例进行描述。
3.吸除固定液，用洗涤液洗涤3 次，每次3-5 分钟。
4.加入免疫染色封闭液，室温封闭 10-20 分钟。免疫染色封闭液的用量充分盖住样品即可，
对于6孔板中的样品，通常加入1ml免疫染色封闭液。
5.吸除免疫染色封闭液，加入 Calreticulin 免单抗，室温孵育 1 小时或 4'℃ 孵育过夜。
Calreticulin 免单抗的用量充分盖住样品即可，对于6孔板或 96 孔板中的样品，通常分
别加入 lml或 50 ulCalreticulin 免单抗。
6.小心吸出 Calreticulin 兔单抗到适当的容器内,4°℃保存,留做下次使用。注:Calreticulin
免单抗通常至少可以重复使用5 次。
7.洗涤液洗涤3 次，每次 5-10 分钟。
8.加入抗兔 FITC 二抗，室温孵育1小时。抗免 FITC 二抗的用量充分盖住样品即可，对于
6 孔板中的样品，通常加入 1ml 抗免 FITC 二抗。
9.小心吸出抗兔 FITC 二抗到适当的容器内，4"℃保存，留做下次使用。
10.洗涤液洗涤2次，每次5~10min；
11.加入细胞核染色液(DAPI)，室温染色5分钟左右。细胞核染色液的用量充分盖住样品即
可，对于6孔板中的样品，通常加入 Iml细胞核染色液(DAPI)
12.吸除细胞核染色液，用洗涤液洗涤3 次，每次 3-5 分钟。