2-8℃避光

两年

1.PBS 2.HBSS

1.离心管
2.吸头
3.一次性手套

1.使用方法需自行参考相关文献资料决定。请根据实验安排或参考文献使用。以下仅供参考。

根据需要使用。以下仅供参考。

1. Brdu储存液的准备
用1X PBS充分溶解适量的Brdu配置10 mg/ml的母液，过滤除菌后，按照0.5ml/管的量分装放在-20°C或者-80°C长期保存，避免反复冻融。Brdu储存液再融化后，4°C可稳定存放一周。

2. 体内Brdu标记
1） 腹腔注射法（常用）：无菌的10 mg/ml（溶于DPBS）适合用于体内注射用。按照100-200 μl（1-2 mg） Brdu的量腹腔注射到小鼠体内。注意：最短在注射后0.5 h后在小肠，胸腺和骨髓瘤处就能检测到Brdu。而一般在注射后24 h内几乎所有组织都能检测到Brdu。这个时间可能对于一些快速分化的组织如小肠来说有些久。
2） 根据自身的实验体系，在合适的时间点处死动物，摘除待研究的组织。使用冰冻切片或者石蜡包埋的方法进行组织处理和切片制备。然后进入后续的IHC染色步骤。

3. 体外Brdu标记（培养原代细胞或者细胞系）
1） 在96孔板上按标准步骤进行细胞培养，培养时间一般为1-72 h；
2） Brdu工作液的准备：用组织细胞培养液按照1:30的比例稀释储存液得到1mM Brdu工作液。然后取10 μl 1 mM Brdu溶液直接加入1 ml组织培养液即得到最终工作液。37°C温热。
3） 按100 μl/孔Brdu工作液的量进行细胞标记，37°C孵育60 min~过夜。同时设置非Brdu标记的细胞作为阴性对照。注意：最佳的孵育时间取决于细胞增殖速度以及需要达到的实验目的。比如，对于快速增殖细胞（如HL-60）有效孵育时间为30-45min；对于原代细胞（如未受外源刺激培养的外周血淋巴细胞）孵育时间可能需要24 h。细胞密度最好不要超过2x106 cells/ml。
4） 制备单细胞层玻片。
5） 将玻片置于70%冰乙醇放在-20°C下固定20-30 min。
6） PBS清洗细胞3次，每次5min。
7） 加入1.5M HCl中室温孵育30 min。
8） 吸去HCl，PBS清洗2次，每次5min。
9） 进入后续ICC染色步骤。

4. 体外Brdu标记（组织薄片）
1） Brdu工作液的准备：用组织细胞培养液按照1:30的比例稀释储存液得到1mM Brdu工作液。然后取10 -20 μl 1 mM Brdu溶液直接加入1 ml组织培养液即得到最终工作液。确保有足够的工作液（37°C温热）完全浸泡组织。
2） 用手术刀或者锋利的刀片将组织切割成约1 mm厚，2 mm2大小的薄片。建议在温热的培养基内进行切片，利于维持组织的活力。
3） 转移组织薄片至预装有10 ml Brdu标记液的15 ml离心管内。于37°，CO2 培养箱内孵育需要的时间。孵育时间可变，取决于组织薄片类型以及需要达到的实验目的（常用的为2-4 h）。直接丢弃未用完的标记液。
4） 37°C PBS清洗组织薄片，每次5 min。
5） 使用标准的冰冻切片或者石蜡包埋切片的方法固定组织。