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产品概述
product description
贝博® BBproExtra® Protein A磁珠是小规模抗体纯化和免疫沉淀蛋白质、蛋白质复合物或其它抗原的理想选择。 将含有抗体的样品添加到Protein A磁珠中，抗体会在短暂的孵化后与磁珠结合。然后，可以使用磁性分离架从珠粒上洗脱结合在珠粒上的，或用于免疫沉淀（IP）。IP之前可能需要进行交联程序以防止初级抗体的共洗脱。磁分离最大限度地减少了抗体样品的损失，并消除了传统离心方法的过多步骤。 蛋白质A磁珠是直径为40μm的超级顺磁珠，用重组Protein A共价包被。
保存温度
2-8℃
注意事项
1.磁珠不可冷冻。
2.以下步骤以100ul磁珠沉淀为例，可以相应的放大或缩小。
2.以下步骤以100ul磁珠沉淀为例，可以相应的放大或缩小。
有效期
一年
仪器准备
1.磁珠分离架
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
试剂准备
1.Binding/Wash buffer
2.Elution buffer
3.Neutralization buffer
2.Elution buffer
3.Neutralization buffer
耗材准备
1.离心管
2.试管
3.吸头
4.一次性手套
2.试管
3.吸头
4.一次性手套
使用方法
1. 通过摇动或涡旋小瓶使珠子完全重新悬浮。
2. 将100μl珠子转移到一个干净的试管中。
3. 将试管放在磁性分离架上，收集珠子。取出并丢弃上清液。
4. 向试管中加入1ml结合/洗涤缓冲液，并将试管倒置几次混合。使用磁性分离架收集磁珠并丢弃上清液。重复此步骤两次。目标IgG的分离
1. 将珠子重新放入100μl结合/洗涤缓冲液中。
2. 将含有目标IgG的样品加入试管中，轻轻倒置试管进行混合。
3. 将试管在室温下进行混匀孵育（在摇床或旋转器上）30–60分钟。
4. 使用磁分离架收集珠子并丢弃上清液。如有必要，保留上清液用于分析。
5. 向试管中加入1ml结合/洗涤缓冲液并充分混匀，使用磁性分离架收集磁珠并丢弃上清液。再重复洗涤步骤三次。
6. 继续洗脱分离的IgG。
分离IgG的洗脱
1. 向试管中加入100μl洗脱缓冲液，混合均匀。在室温下静置5分钟，中途混匀一次。
2. 使用磁分离架收集珠粒，并将含有洗脱的IgG的上清液转移到到干净的试管中。
3. 重复步骤1和2两次。
4. 向每100μl洗脱液中加入10μl中和缓冲液，以中和pH值。如果需要，通过透析或脱盐进行缓冲更换。
2. 将100μl珠子转移到一个干净的试管中。
3. 将试管放在磁性分离架上，收集珠子。取出并丢弃上清液。
4. 向试管中加入1ml结合/洗涤缓冲液，并将试管倒置几次混合。使用磁性分离架收集磁珠并丢弃上清液。重复此步骤两次。目标IgG的分离
1. 将珠子重新放入100μl结合/洗涤缓冲液中。
2. 将含有目标IgG的样品加入试管中，轻轻倒置试管进行混合。
3. 将试管在室温下进行混匀孵育（在摇床或旋转器上）30–60分钟。
4. 使用磁分离架收集珠子并丢弃上清液。如有必要，保留上清液用于分析。
5. 向试管中加入1ml结合/洗涤缓冲液并充分混匀，使用磁性分离架收集磁珠并丢弃上清液。再重复洗涤步骤三次。
6. 继续洗脱分离的IgG。
分离IgG的洗脱
1. 向试管中加入100μl洗脱缓冲液，混合均匀。在室温下静置5分钟，中途混匀一次。
2. 使用磁分离架收集珠粒，并将含有洗脱的IgG的上清液转移到到干净的试管中。
3. 重复步骤1和2两次。
4. 向每100μl洗脱液中加入10μl中和缓冲液，以中和pH值。如果需要，通过透析或脱盐进行缓冲更换。
常见问题分析
1.磁珠分离架很难固定磁珠。
使用了过多磁珠，建议减少磁珠体积。
2.已经添加了较多样品，但是没有目标抗体：
目标抗体浓度太低，建议使用特异性抗原亲和纯化抗体
使用了过多磁珠，建议减少磁珠体积。
2.已经添加了较多样品，但是没有目标抗体：
目标抗体浓度太低，建议使用特异性抗原亲和纯化抗体
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