细胞内囊泡提取试剂盒-快速,超纯

BB-36914
选择规格
  • 20T
  • 50T
价格
  • ¥1900元
  • ¥3300元
数量
产品概述 product description

贝博® 细胞内囊泡(Vesicles)提取试剂盒(快速超纯)适用于从各种原代或传代培养细胞样品中提取高纯度总囊泡。不需要超速离心,仅需通过简单的常规离心即可从样本中快速获取大量结构完整的囊泡,具有快速简单,提取效率高的特点,可节省更多的实验时间和样本。提取的囊泡可根据实验目的用于后续的多种实验,应用范围广泛。 本试剂盒可以提取所有直径为10 nm - 3000 nm的囊泡结构。 贝博® 生物自主开发的囊泡快速提取试剂盒系列产品,可以通过简单离心快速高效获得高纯度囊泡颗粒。本试剂盒提取的囊泡完好无缺,能用于各种功能研究、蛋白分析及RNA分析、电镜分析、NTA粒径分析等下游实验应用。 贝博® BBcellProbe® 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。 贝博® BBcellProbe® 可以为您提供各种颜色的BBcellProbe® M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品,以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。 贝博® BBcellProbe® 可以提供动物、植物、微生物、酵母、水产、家禽、兽类、土壤等样本的各种生化指标检测的数百种试剂盒产品

保存温度
2-8℃
注意事项
1.离心管中的过滤膜一旦润湿后应避免变干。如果在预清洗后不是立即使用,则让液体保留在滤膜上,直到使用。
2.试剂拆封后请尽快使用完!
有效期
一年
检测方法
提取
适用样本
动物细胞
产品特点
1.使用方便,无需超速离心,省时省力;
2.纯度高,富集量大,应用范围广;
3.获取的囊泡结构和功能完整;
4.稳定性好,便于运输,便于保存。
产品应用
根据需要使用
仪器准备
1.离心机
2.移液器
3.冰箱
4.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液 (pH7.4,实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液(1X)) (phosphate buffer saline/Dulbecco’s PBS:约含8mM Na2HPO4、2mM KH2PO4、137mM NaCl和3mM KCl)
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
1.不同细胞的囊泡数量差异极大,请根据实际情况选择样品的量,根据下游应用和参考文献确定。条件允许的情况下采用尽可能多的细胞。
2.在收获细胞时,应确定死亡细胞不超过5%。细胞凋亡/死亡过程中会释放大量大小不等的囊泡,它们在囊泡的提取过程中会污染活细胞产生的囊泡。
3.已经分离好的囊泡样本如果需要进行电镜观察,只能冰上或4℃保存,存放时间不超过两天,注意不可冷冻保存,否则可能会影响电镜观察效果。
使用方法
囊泡提取:
1. 取5-10×106个细胞,在4℃,500×g力条件下离心5分钟,小心吸取培养基,尽可能吸干,收集细胞。
2. 用冷PBS洗涤细胞两次,每次洗涤后尽可能吸干上清。
3. 细胞沉淀中加入500 μl-1 ml试剂A,充分混匀(每20 μl体积细胞沉淀(约20 mg,2×106个细胞)中加入200-300 μl冷的提取液 A),高速涡旋振荡混匀或吹打混匀,置2-8℃条件振荡10-30分钟。
4. 然后在4℃,2000×g条件下离心5分钟。弃沉淀,收集上清。
5. 将上清吸入另一预冷的干净离心管。
6. 在4℃条件下,3000×g离心10分钟。弃沉淀,收集上清。
7. 将上清吸入另一预冷的干净离心管。得到囊泡粗提液。
8. 将囊泡粗提液进行下列囊泡纯化步骤操作。

清洗囊泡纯化离心管:
1. 用缓冲液或纯水进行预清洗。
2. 离心管中的过滤膜一旦润湿后应避免变干。如果在预清洗后不是立即使用,则让液体保留在滤膜上,直到使用。

囊泡纯化:
1. 将囊泡纯化离心管内管插入所提供的一个微量离心管中。
2. 向内管中加入过500 μl的囊泡粗提液样本,并盖上盖子。
3. 将盖好盖子的囊泡纯化离心管放入离心转子中,让盖子的连接带朝着转子的中央;用一个类似的离心管平衡。
4. 以5000-8000 ×g离心约10-15分钟。离心至大约剩余50 μl-100 μl液体。
5. 离心结束后将整个离心管从离心机中取出,取出内管。
6. 为了回收纯化后的囊泡,将内管倒过来插在另一个干净的微量离心管中。放在离心机中,让打开的盖子朝着转子的中央;用一个类似的离心管进行平衡。
7. 以1000 ×g离心2分钟,使纯化后的囊泡样本从纯化内管转移到收集管中。
8. 吸取收集管中的液体,即得到囊泡样品纯品。
9. 用纯水或PBS缓冲液洗涤内管和收集管,继续纯化下一个样品。

囊泡纯化离心管清洗和保存:
1. 使用后用水冲洗干净;
2. 内管加入超纯水500 µl,5000×g离心5分钟;
3. 吸净内管中的水,加入500 µl 0.1 M NaOH,5000×g离心20分钟;
4. 用0.1 M NaOH 浸泡24小时;
5. 用水冲洗干净;
6. 用无菌水浸泡2-8℃保存。
7. 外管用自来水洗净后,用超纯水冲洗干净,晾干。

常见问题分析
1.蛋白浓度低?
很多细胞囊泡量不够下游应用,在条件允许的情况请尽可能加大培养上清的上样量。
处理部分样本时可能没有裂解完全,导致蛋白浓度低。请选择高质量的蛋白裂解液或蛋白提取试剂盒。

2.抽提得到的RNA浓度低?
很多细胞囊泡量不够下游应用,在条件允许的情况请尽可能加大培养上清的上样量。

3.囊泡纯化管内管膜会因为离心时间过长而变干么?
不会,因为内管有死体积,总会有溶液残留在内管中。死体积大约10-20 μl。

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