2-8℃

试剂拆封后请尽快使用完！

一年

提取

植物

根据需要使用

1.离心机2.振荡器3.Dounce匀浆器4.涡旋混匀器5.移液器6.冰箱7.冰盒

1.PBS缓冲液

1.离心管2.吸头3.一次性手套

 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

1. 取洗净擦干后并去除叶梗和粗脉的100-200mg鲜嫩植物组织样本用锋利的刀片划成尽可能小的碎片。【注】： 也可用手术剪刀尽可能剪碎。2. 加入500ul洗涤液A充分混匀。3. 在30℃条件下静置15分钟。4. 在2000×g条件下离心10分钟，弃上清，收集沉淀。5. 在沉淀中加入500ul提取液B，充分混匀。【注】： 培养细胞1000×g条件下离心5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞后用PBS洗涤2次，然后直接加入提取液B重悬。 大约每300ul细胞压积中加入1ml提取液B。 根据实际样本体积调整提取液用量，一般试剂是样本体积的2-3倍，充分淹没样本即可。6. 将提取液B样本悬液置振荡器上37℃-45℃或室温振荡24-72小时。【注】： 使用振荡器/摇床的较低转速，保证提取液能轻微晃动即可。 没有振荡条件也可以不振荡，中间每隔几小时用移液器吹打混匀即可。 根据下游核和胞质的应用选择合适的温度，最高温度为55℃时制备速度最快。但是温度过高会影响样本活性，请根据下游应用选择温度。 不同类型的植物样本需要处理的时间差异较大。拟南芥较易处理，鲜嫩叶片较易处理，年龄小的样本处理时间短。 部分细胞壁较厚的植物类型可能需要处理更长时间。可以延长至72小时以上处理以提高得率。7. 在2000×g离心5分钟，弃上清，收集沉淀。【注】： 有条件的话最好用100um细胞筛网过滤提取液B处理液后，收集滤液再离心。 没有细胞筛可以不过滤。8. 用PBS洗涤沉淀一次。【注】： 在2000×g离心5分钟。9. 在沉淀中加入500ul试剂C重悬沉淀，充分混匀。用匀浆机/匀浆器匀浆。10. 置4℃振荡20-30分钟。【注】： 用振荡器/摇床的较低转速，保持液体稍微有晃动即可。 没有低温振荡条件可以不振荡，在2-8℃静置，稍微延长处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀。11. 在4℃，800×g力条件下离心5分钟。12. 移除上清至另一干净离心管。上清为细胞质部分，沉淀为细胞核。13. 用相应的缓冲液重悬细胞核沉淀，将两个样本置冰箱备用或直接用于下游实验。

 Binhui Zhan , Wenyang Zhao, et al. Functional Scanning of Apple Geminivirus Proteins as Symptom Determinants and Suppressors of Posttranscriptional Gene SilencingViruses. 2018 （IF=3.761）