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产品概述
product description
线粒体(mitochondria)是真核细胞中产生能量的重要细胞器。细胞中的能源物质-脂肪、糖、部分氨基酸在此进行最终的氧化,并通过偶联磷酸化生成 ATP,供给细胞生理活动之需对线粒体结构与功能的研究通常是在离体的线粒体上进行的,本试剂盒用简便快速的方法即可在 40 分钟内提取得到线粒体。
贝博®BBproExtra。脂肪组织线粒体提取试剂盒可用于各种脂肪组织和各种脂肪含量高的实体组织如脑、脂肪、脂肪肝脏、结缔组织、胸腺组织等动物组织中提取线粒体提取。
保存温度
2-8℃
注意事项
1.试剂开盖后按相应的组分保存条件保存；
2.试剂拆封后请尽快使用完！
2.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
一年
检测方法
WB， IP等
适用样本
脂肪组织
产品应用
WB， IP等
仪器准备
1.离心机
2.振荡器
3.匀浆机/匀浆器
4.涡旋混匀器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒
2.振荡器
3.匀浆机/匀浆器
4.涡旋混匀器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液
2.蛋白定量试剂盒
2.蛋白定量试剂盒
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
1.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落
2.实验过程中的所有试剂须预冷:所有器具须放-20℃℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
3.最好使用 Dounce 匀浆器匀浆，如果没有 Dounce 匀浆器，用普通玻璃匀浆器匀浆也可，线粒体回收率会下降。
2.实验过程中的所有试剂须预冷:所有器具须放-20℃℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
3.最好使用 Dounce 匀浆器匀浆，如果没有 Dounce 匀浆器，用普通玻璃匀浆器匀浆也可，线粒体回收率会下降。
使用方法
1.取 50-100 mg 新鲜动物组织样本，用 PBS 洗涤干净。
2.用剪刀尽可能剪碎，用冷 PBS 洗涤两次。
3.加入 500 μ1-1000 μl 冷的试剂 A，置冰上 10 分钟。
4.用 Dounce 勻浆器匀浆 30-40 次。
5.然后在 4℃，500xg 条件下离心5分钟。弃沉淀，收集上清。
6.将上清在 4℃，1000xg 力条件下离心 10 分钟。弃沉淀，收集上清。
7.将上清在 4℃，2000xg 力条件下离心 10 分钟。弃沉淀，收集上清。
8.将上清在 4℃，11000xg 离心 20 分钟。弃上清，留沉淀。
9.在沉淀中加入 500 ul冷的试剂 B，混匀。
10.在 4℃，11000xg 离心20分钟。弃上清，留沉淀
11.沉淀用线粒体保存液重悬。
12.即得到线粒体样品，置冰箱备用或直接用于下游实验。
2.用剪刀尽可能剪碎，用冷 PBS 洗涤两次。
3.加入 500 μ1-1000 μl 冷的试剂 A，置冰上 10 分钟。
4.用 Dounce 勻浆器匀浆 30-40 次。
5.然后在 4℃，500xg 条件下离心5分钟。弃沉淀，收集上清。
6.将上清在 4℃，1000xg 力条件下离心 10 分钟。弃沉淀，收集上清。
7.将上清在 4℃，2000xg 力条件下离心 10 分钟。弃沉淀，收集上清。
8.将上清在 4℃，11000xg 离心 20 分钟。弃上清，留沉淀。
9.在沉淀中加入 500 ul冷的试剂 B，混匀。
10.在 4℃，11000xg 离心20分钟。弃上清，留沉淀
11.沉淀用线粒体保存液重悬。
12.即得到线粒体样品，置冰箱备用或直接用于下游实验。
常见问题分析
1.线粒体量少?
增加匀浆器匀浆次数。
需要足够的组织样品的上样量。
2.提取的线粒体具有活性吗?
本试剂盒提取的线粒体均保持其天然结构和活性
增加匀浆器匀浆次数。
需要足够的组织样品的上样量。
2.提取的线粒体具有活性吗?
本试剂盒提取的线粒体均保持其天然结构和活性
参考文献
1. Lian Duan et al.
Lycopene restores the effeet of ischemic postconditioning on myocardial ischemia-reperfusion injury in hypercholesterolemie rats
International Journal ofMolecular Medicine 2019
2.Xiao Jiang et al.
Overexpression of augmenter of liver regeneration (ALR) mitigates the effect of H202-induced
endoplasmic reticulum stress in renal tubule epithelial cells
Apoptosis 2019
3. Tao Li et al.
Polydatin mediates Parkin-dependent mitophagy and protects against mitochondria-dependent
apoptosis in acute respiratory distress syndrome
Laboratory Investigation 2019
4.Jie Ouyang et al.
SIRT3 Inactivation Promotes Acute Kidney lnjury Through Elevated Acetylation of SOD2 and
p53 Journal of Surgical Research 2019
Lycopene restores the effeet of ischemic postconditioning on myocardial ischemia-reperfusion injury in hypercholesterolemie rats
International Journal ofMolecular Medicine 2019
2.Xiao Jiang et al.
Overexpression of augmenter of liver regeneration (ALR) mitigates the effect of H202-induced
endoplasmic reticulum stress in renal tubule epithelial cells
Apoptosis 2019
3. Tao Li et al.
Polydatin mediates Parkin-dependent mitophagy and protects against mitochondria-dependent
apoptosis in acute respiratory distress syndrome
Laboratory Investigation 2019
4.Jie Ouyang et al.
SIRT3 Inactivation Promotes Acute Kidney lnjury Through Elevated Acetylation of SOD2 and
p53 Journal of Surgical Research 2019
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