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产品概述
product description
线粒体(mitochondria)是真核细胞中产生能量的重要细胞器。细胞中的能源物质—脂肪、糖、部分氨基酸在此进行最终的氧化，并通过偶联磷酸化生成ATP，供给细胞生理活动之需。对线粒体结构与功能的研究通常是在离体的线粒体上进行的，本试剂盒用简便快速的方法即可在1小时内提取得到线粒体蛋白。 贝博® BBproExtra® 线粒体蛋白提取试剂盒含有的独特配方能够有效溶解线粒体膜组份。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。 本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。 本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。 本试剂盒的蛋白提取组份中不含有不可透析除去的去垢剂组份，不含SDS、Triton X-100、chaps等可能影响质谱实验的组份，最后得到的蛋白质样品经过透析或者脱盐处理后将不含有去垢剂、高浓度盐等影响，基本可以满足下游任意的蛋白质组学相关实验研究。 本产品的蛋白酶抑制剂混合物中不含AEBSF，可以避免由于AEBSF导致的质谱峰漂移，因此使用本产品提取的蛋白样品可以用于质谱(Mass Spectrometry, MS)检测和分析，蛋白质组学(proteomics)等相关研究。
保存温度
2-8℃
注意事项
1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
一年
检测方法
质谱分析
适用样本
植物
产品特点
1.使用方便。
2.含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
3.紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
4.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含5种独立的蛋白酶抑制剂Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
2.含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
3.紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
4.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含5种独立的蛋白酶抑制剂Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
产品应用
质谱分析
仪器准备
1.离心机
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液
2.蛋白定量试剂盒
2.蛋白定量试剂盒
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
使用注意事项：
旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
使用方法
1. 提取液准备：
将试剂C1和试剂C2混合，配成蛋白提取液C，充分混匀备用。
每500ul蛋白提取液C中加入2ul蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取200-500mg新鲜植物样本叶片，用PBS洗净擦干后去除叶梗和粗脉。用手术剪刀或刀片尽可能剪碎。
3. 加入2ml提取液A后用匀浆机充分匀浆或者加适量提取液A后用匀浆机/Dounce匀浆器充分匀浆。
4. 将匀浆液用100um细胞筛过滤。
5. 将滤液在500×g离心5分钟，弃沉淀，取上清。
6. 将上清在800×g条件下离心5分钟，弃沉淀，收集上清。
7. 将上清在2000×g条件下离心5分钟，弃沉淀，收集上清。
8. 将上清12000×g离心20分钟。弃上清，收集沉淀。
9. 将沉淀用500ul试剂B重悬。
10. 将悬液12000×g力离心20分钟，弃上清，收集沉淀。
11. 在沉淀中加入100-300ul线粒体蛋白提取液C，充分混匀。
12. 在4℃条件下振荡20-40分钟。
13. 在4℃，12000×g条件下离心15分钟。
14. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到线粒体蛋白。
15. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
16. 将蛋白样品透析处理或者脱盐柱脱盐处理后用于不能含有去污剂/盐的下游实验。
将试剂C1和试剂C2混合，配成蛋白提取液C，充分混匀备用。
每500ul蛋白提取液C中加入2ul蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取200-500mg新鲜植物样本叶片，用PBS洗净擦干后去除叶梗和粗脉。用手术剪刀或刀片尽可能剪碎。
3. 加入2ml提取液A后用匀浆机充分匀浆或者加适量提取液A后用匀浆机/Dounce匀浆器充分匀浆。
4. 将匀浆液用100um细胞筛过滤。
5. 将滤液在500×g离心5分钟，弃沉淀，取上清。
6. 将上清在800×g条件下离心5分钟，弃沉淀，收集上清。
7. 将上清在2000×g条件下离心5分钟，弃沉淀，收集上清。
8. 将上清12000×g离心20分钟。弃上清，收集沉淀。
9. 将沉淀用500ul试剂B重悬。
10. 将悬液12000×g力离心20分钟，弃上清，收集沉淀。
11. 在沉淀中加入100-300ul线粒体蛋白提取液C，充分混匀。
12. 在4℃条件下振荡20-40分钟。
13. 在4℃，12000×g条件下离心15分钟。
14. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到线粒体蛋白。
15. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
16. 将蛋白样品透析处理或者脱盐柱脱盐处理后用于不能含有去污剂/盐的下游实验。
常见问题分析
1.蛋白浓度低？
处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
2.用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
3.提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。
处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
2.用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
3.提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。
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