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产品概述
product description
贝博® BBproExtra® 固定细胞蛋白提取试剂盒适用于从各种固定的细胞样本中提取总蛋白，适用于乙醇固定、甲醛固定、多聚甲醛固定、其它混合固定液固定的细胞样本。 提取过程简单方便，提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫共沉淀等下游蛋白研究。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、藻类、液体、土壤等各种不同样本的蛋白提取试剂盒。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对细胞膜、核、胞质、线粒体、溶酶体、高尔基体、内质网、外泌体等细胞不同部位的蛋白提取试剂盒。
保存温度
2-8℃
注意事项
1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
一年
检测方法
WB,IP等
适用样本
动物细胞
产品应用
WB,IP等
仪器准备
1.离心机
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液
2.蛋白定量试剂盒
2.蛋白定量试剂盒
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
使用注意事项：
旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
使用方法
1. 提取液制备：
每500ul蛋白提取液中加入5ul蛋白提取液B，混匀后备用。
2. 每1×107个细胞中加入500ul蛋白提取液，涡旋振荡10秒。
3. 在恒温器（Heat Block）或水浴锅中100℃保温20分钟。
4. 涡旋振荡10秒混匀。
5. 在恒温器（Heat Block）或水浴锅中60℃保温1-2小时。
6. 涡旋振荡10秒混匀。
7. 在12000×g条件下离心10分钟。
8. 将上清吸入另一干净离心管，即可得到总蛋白。
9. 将上述蛋白提取物定量后分装保存备用或直接用于下游实验。
每500ul蛋白提取液中加入5ul蛋白提取液B，混匀后备用。
2. 每1×107个细胞中加入500ul蛋白提取液，涡旋振荡10秒。
3. 在恒温器（Heat Block）或水浴锅中100℃保温20分钟。
4. 涡旋振荡10秒混匀。
5. 在恒温器（Heat Block）或水浴锅中60℃保温1-2小时。
6. 涡旋振荡10秒混匀。
7. 在12000×g条件下离心10分钟。
8. 将上清吸入另一干净离心管，即可得到总蛋白。
9. 将上述蛋白提取物定量后分装保存备用或直接用于下游实验。
常见问题分析
1.蛋白浓度低？
固定的细胞组织的蛋白质回收率较低，甲醛固定样本回收率在30%左右。
需要加大细胞组织样本上样量，调整提取液用量来调整蛋白浓度。
2.WB做不出来？
固定样本的蛋白质回收率在30%左右。低丰度蛋白通常较难检出。
甲醛固定的蛋白质末端基团与甲醛之间形成交联链，各种氨基，亚氨基及酰氨基，肽，胍基，羟基，SH和芳香环等都会参与甲醛固定蛋白质的基团反应，在这个过程中，绝大部分常规的暴露抗原决定基团遭到破坏，从甲醛固定样本回收的蛋白质做WB成功的概率较低，最好选用抗体说明书上同时可以做WB和IHC的抗体。
固定的细胞组织的蛋白质回收率较低，甲醛固定样本回收率在30%左右。
需要加大细胞组织样本上样量，调整提取液用量来调整蛋白浓度。
2.WB做不出来？
固定样本的蛋白质回收率在30%左右。低丰度蛋白通常较难检出。
甲醛固定的蛋白质末端基团与甲醛之间形成交联链，各种氨基，亚氨基及酰氨基，肽，胍基，羟基，SH和芳香环等都会参与甲醛固定蛋白质的基团反应，在这个过程中，绝大部分常规的暴露抗原决定基团遭到破坏，从甲醛固定样本回收的蛋白质做WB成功的概率较低，最好选用抗体说明书上同时可以做WB和IHC的抗体。
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