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产品概述
product description
贝博® BBproExtra® 甲醛固定组织蛋白提取试剂盒适用于从各种经甲醛固定的组织样本中提取总蛋白，提取过程简单方便，提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫共沉淀等下游蛋白研究。 本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于2D电泳，如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用贝博其他货号的试剂盒。也可以将最后样品除盐后再用于2D电泳，用脱盐柱脱盐处理（相关产品BB-38113）。 贝博® BBproExtra® 可以提供各种蛋白质提取、裂解、酶活测定、细胞器分离、免疫组织化学、蛋白表达、蛋白标记等蛋白质相关试剂盒产品。
保存温度
2-8℃
注意事项
1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
一年
检测方法
WB,IP等
适用样本
动物组织
产品应用
WB,IP等
仪器准备
1.离心机
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液
2.蛋白定量试剂盒
2.蛋白定量试剂盒
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
使用注意事项：
旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
注意低丰度蛋白的检测方法。
离心机转速有相对离心力（RCF，×g）和每分钟转速（RPM，r/min）两种表示方式，有些离心机设置有RPM和×g显示切换，但部分离心机没有自动切换功能。需要用下面的公式进行换算：
g=r×1.118×10-5×rpm2 （r 为有效离心半径，即从离心机轴心到离心收集管底部中心位置的长度，单位为厘米) 例如: 转速为3000 rpm，有效离心半径为10 cm，则相对离心力（RCF，×g）为=10×1.118×10-5×30002=1006.2（×g）。
旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
注意低丰度蛋白的检测方法。
离心机转速有相对离心力（RCF，×g）和每分钟转速（RPM，r/min）两种表示方式，有些离心机设置有RPM和×g显示切换，但部分离心机没有自动切换功能。需要用下面的公式进行换算：
g=r×1.118×10-5×rpm2 （r 为有效离心半径，即从离心机轴心到离心收集管底部中心位置的长度，单位为厘米) 例如: 转速为3000 rpm，有效离心半径为10 cm，则相对离心力（RCF，×g）为=10×1.118×10-5×30002=1006.2（×g）。
使用方法
1. 提取液制备：
每500 μl蛋白提取液中加入5 μl蛋白提取液B，混匀后备用。
2. 将组织样品用手术剪刀剪碎，每100 mg样本中加入500 μl蛋白提取液，涡旋振荡10秒。
3. 在恒温器（Heat Block）或水浴锅中100℃保温20分钟。
4. 涡旋振荡10秒混匀。
5. 在恒温器（Heat Block）或水浴锅中60℃保温1-2小时。
6. 涡旋振荡10秒混匀。
7. 在12000×g条件下离心15分钟。
8. 将上清吸入另一干净离心管，即可得到总蛋白。
9. 将上述蛋白提取物定量后分装保存备用或直接用于下游实验。
每500 μl蛋白提取液中加入5 μl蛋白提取液B，混匀后备用。
2. 将组织样品用手术剪刀剪碎，每100 mg样本中加入500 μl蛋白提取液，涡旋振荡10秒。
3. 在恒温器（Heat Block）或水浴锅中100℃保温20分钟。
4. 涡旋振荡10秒混匀。
5. 在恒温器（Heat Block）或水浴锅中60℃保温1-2小时。
6. 涡旋振荡10秒混匀。
7. 在12000×g条件下离心15分钟。
8. 将上清吸入另一干净离心管，即可得到总蛋白。
9. 将上述蛋白提取物定量后分装保存备用或直接用于下游实验。
常见问题分析
1.蛋白浓度低？
固定组织的蛋白质回收率在30%左右。
需要加大组织上样量，调整提取液用量来调整蛋白浓度。
2.WB实验无条带？
固定组织的蛋白质回收率在30%左右。低丰度蛋白通常较难检出。
甲醛固定的蛋白质末端基团与甲醛之间形成交联链，各种氨基，亚氨基及酰氨基，肽，胍基，羟基，SH和芳香环等都会参与甲醛固定蛋白质的基团反应，在这个过程中，绝大部分常规的暴露抗原决定基团遭到破坏，从甲醛固定样本回收的蛋白质做WB成功的概率较低，最好选用抗体说明书上同时可以做WB和IHC的抗体。
固定组织的蛋白质回收率在30%左右。
需要加大组织上样量，调整提取液用量来调整蛋白浓度。
2.WB实验无条带？
固定组织的蛋白质回收率在30%左右。低丰度蛋白通常较难检出。
甲醛固定的蛋白质末端基团与甲醛之间形成交联链，各种氨基，亚氨基及酰氨基，肽，胍基，羟基，SH和芳香环等都会参与甲醛固定蛋白质的基团反应，在这个过程中，绝大部分常规的暴露抗原决定基团遭到破坏，从甲醛固定样本回收的蛋白质做WB成功的概率较低，最好选用抗体说明书上同时可以做WB和IHC的抗体。
参考文献
1.Wei Liu et al.
TRIP6 regulates the proliferation, migration, invasion and apoptosis of osteosarcoma cells by activating the NF‑κB signaling pathway
Experimental and Therapeutic Medicine 2020
TRIP6 regulates the proliferation, migration, invasion and apoptosis of osteosarcoma cells by activating the NF‑κB signaling pathway
Experimental and Therapeutic Medicine 2020
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