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产品概述
product description
石蜡包埋组织是重要的临床材料，研究其中正常细胞和疾病相关的细胞，特别是癌细胞中标记蛋白的差异表达水平，对于癌化的进展、癌症类型的判定，以方便于诊断和治疗具有重要的意义。 贝博® BBproExtra® 石蜡包埋组织蛋白提取试剂盒适用于从各种石蜡包埋的组织样本中提取总蛋白，提取过程简单方便，提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳等下游蛋白研究。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、液体、土壤等各种不同样本的蛋白提取试剂盒。可以提供针对不同下游实验应用的试剂盒，例如用于Western Blotting和双向电泳等不同下游应用的试剂盒；含去垢剂成分和不含去污剂成分的蛋白提取试剂盒；专用于蛋白质谱检测、Pull-down实验的试剂盒等总计300多种蛋白提取试剂盒可供选择。 贝博® BBproExtra® 还可以提供针对动物、植物等不同样本的细胞核、线粒体、溶酶体、叶绿体、外泌体等不同细胞器的提取试剂盒。
保存温度
2-8℃
注意事项
1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
一年
检测方法
WB,IP等
适用样本
动物组织
产品应用
WB,IP等
仪器准备
1.离心机
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液
2.蛋白定量试剂盒
2.蛋白定量试剂盒
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
使用注意事项：
旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
注意低丰度蛋白的检测方法。
离心机转速有相对离心力（RCF，×g）和每分钟转速（RPM，r/min）两种表示方式，有些离心机设置有RPM和×g显示切换，但部分离心机没有自动切换功能。需要用下面的公式进行换算：
g=r×1.118×10-5×rpm2 （r 为有效离心半径，即从离心机轴心到离心收集管底部中心位置的长度，单位为厘米) 例如: 转速为3000 rpm，有效离心半径为10 cm，则相对离心力（RCF，×g）为=10×1.118×10-5×30002=1006.2（×g）。
旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
注意低丰度蛋白的检测方法。
离心机转速有相对离心力（RCF，×g）和每分钟转速（RPM，r/min）两种表示方式，有些离心机设置有RPM和×g显示切换，但部分离心机没有自动切换功能。需要用下面的公式进行换算：
g=r×1.118×10-5×rpm2 （r 为有效离心半径，即从离心机轴心到离心收集管底部中心位置的长度，单位为厘米) 例如: 转速为3000 rpm，有效离心半径为10 cm，则相对离心力（RCF，×g）为=10×1.118×10-5×30002=1006.2（×g）。
使用方法
1. 提取液制备：
每500 μl蛋白提取液中加入5 μl蛋白提取液B，混匀后备用。
2. 样本常规脱蜡，然后用流水冲洗30分钟。
3. 将样本用手术剪刀尽可能剪碎，每100 mg样本中加入300-500 μl蛋白提取液，涡旋振荡10秒。
4. 在37℃条件振荡1小时。
5. 在恒温器（Heat Block）或水浴锅中100℃保温10分钟。
6. 涡旋振荡10秒混匀。
7. 在恒温器（Heat Block）或水浴锅中60℃保温1小时。
8. 涡旋振荡10秒混匀。
9. 在12000×g条件下离心15分钟。
10. 将上清吸入另一干净离心管，即可得到总蛋白。
11. 将上述蛋白提取物定量后分装保存备用或直接用于下游实验。
每500 μl蛋白提取液中加入5 μl蛋白提取液B，混匀后备用。
2. 样本常规脱蜡，然后用流水冲洗30分钟。
3. 将样本用手术剪刀尽可能剪碎，每100 mg样本中加入300-500 μl蛋白提取液，涡旋振荡10秒。
4. 在37℃条件振荡1小时。
5. 在恒温器（Heat Block）或水浴锅中100℃保温10分钟。
6. 涡旋振荡10秒混匀。
7. 在恒温器（Heat Block）或水浴锅中60℃保温1小时。
8. 涡旋振荡10秒混匀。
9. 在12000×g条件下离心15分钟。
10. 将上清吸入另一干净离心管，即可得到总蛋白。
11. 将上述蛋白提取物定量后分装保存备用或直接用于下游实验。
常见问题分析
1.蛋白浓度低？
固定组织的蛋白质回收率在30%左右。
需要加大组织上样量，调整提取液用量来调整蛋白浓度。
2.WB做不出来？
固定组织的蛋白质回收率较低，一般在30%左右。低丰度蛋白通常较难检出。
甲醛固定的蛋白质末端基团与甲醛之间形成交联链，各种氨基，亚氨基及酰氨基，肽，胍基，羟基，SH和芳香环等都会参与甲醛固定蛋白质的基团反应，在这个过程中，绝大部分常规的暴露抗原决定基团遭到破坏，通常从甲醛固定石蜡包埋的样本回收的蛋白质做WB成功的概率较低，最好选用抗体说明书上同时可以做WB和IHC应用的抗体。
固定组织的蛋白质回收率在30%左右。
需要加大组织上样量，调整提取液用量来调整蛋白浓度。
2.WB做不出来？
固定组织的蛋白质回收率较低，一般在30%左右。低丰度蛋白通常较难检出。
甲醛固定的蛋白质末端基团与甲醛之间形成交联链，各种氨基，亚氨基及酰氨基，肽，胍基，羟基，SH和芳香环等都会参与甲醛固定蛋白质的基团反应，在这个过程中，绝大部分常规的暴露抗原决定基团遭到破坏，通常从甲醛固定石蜡包埋的样本回收的蛋白质做WB成功的概率较低，最好选用抗体说明书上同时可以做WB和IHC应用的抗体。
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