bestbio@163.com
服务热线：021-33921235
登录
说明书下载
产品概述
product description
贝博® BBproExtra® 细胞培养上清样品蛋白提取试剂盒适用于从细胞培养上清、细菌、酵母培养上清等液体样品中提取蛋白。
提取过程简单方便，可在1小时内完成。
提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫共沉淀、酶活性测定等下游蛋白研究。
本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。
本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。
本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于2D电泳，如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用贝博® 其他货号的试剂盒。也可以将最后样品脱盐后再用于2D电泳，用脱盐柱脱盐处理（相关产品BB-38113）。
保存温度
2-8℃
注意事项
1. 蛋白提取管配有2个微量离心管。
2. 在操作过程中，一个可用于收集滤出液，而另一个用于回收提取后的样本。
3. 用过的蛋白提取管要保持过滤膜湿润，不能干掉。4. 有效期为试剂盒未拆封前按要求条件保存的有效期。
5. 试剂拆封后请尽快使用完！
2. 在操作过程中，一个可用于收集滤出液，而另一个用于回收提取后的样本。
3. 用过的蛋白提取管要保持过滤膜湿润，不能干掉。4. 有效期为试剂盒未拆封前按要求条件保存的有效期。
5. 试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
一年
检测方法
WB,IP,co-IP,ELISA,EMSA等
适用样本
细胞培养上清
仪器准备
1. 离心机。可容纳1.5ml微量离心管的固定角度转子离心机。
2. 移液器
3. 冰箱
4. 冰盒
2. 移液器
3. 冰箱
4. 冰盒
试剂准备
1. 纯水
2. PBS缓冲液
3. 蛋白定量试剂盒
2. PBS缓冲液
3. 蛋白定量试剂盒
耗材准备
1. 离心管
2. 吸头
3. 一次性手套
2. 吸头
3. 一次性手套
使用注意事项
1. 在操作过程中，一个离心套管可用于收集滤出液，而另一个用于回收提取后的样本。
2. 用过的蛋白提取管要保持过滤膜湿润，不能干掉。
2. 用过的蛋白提取管要保持过滤膜湿润，不能干掉。
使用方法
清洗蛋白提取管：
1. 用缓冲液或纯水进行预清洗。也可先用0.1 M NaOH清洗，再用缓冲液或纯水进行二次清洗。
2. 离心管中的过滤膜一旦润湿后应避免变干。如果在预清洗后不是立即使用，则让液体保留在滤膜上，直到使用。
样品处理:
1. 在500 μl待提取上清样品中加入5 μl蛋白吸附抑制剂和5 μl蛋白酶抑制剂。充分混匀备用。
2. 每500 μl上清样本中加入100 μl蛋白提取液，充分混匀后，在4℃条件下振荡5-10分钟。
3. 在4℃，15000×g条件下离心20分钟。
4. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，待后续蛋白提取管离心过滤。
操作步骤：
1. 将内管插入所提供的一个微量离心管中。
2. 向内管中加入不超过500 μl的以上步骤中处理过的上清样本，并盖上盖子。
3. 将盖好盖子的蛋白提取管放入离心转子中，让盖子的连接带朝着转子的中央；用一个类似的离心管平衡。
4. 以2000-10000 x g离心约10-30分钟。
5. 离心结束后将整个蛋白提取管从离心机中取出，取出内管。
6. 为了回收过滤后的液体，将内管倒过来插在另一个干净的微量离心管中。放在离心机中，让打开的盖子朝着转子的中央；用一个类似的离心管进行平衡。以1,000 x g离心2分钟，使剩余后的样本从蛋白提取内管转移到收集管中。滤液可以保存在收集管中。
7. 将蛋白提取管清洗后用于提取其它上清蛋白样品。
清洗和保存：
1. 使用后用水冲洗干净；
2. 内管加入超纯水500 µl，5000g离心5分钟；
3. 净内管中的水，加入500 µl 0.1M NaOH，5000g离心20分钟；
4. 用0.1 M NaOH 浸泡24小时；
5. 用水冲洗干净；
6. 用无菌水浸泡2-8℃保存。
7. 外管用自来水洗净后，用超纯水冲洗干净，晾干。
1. 用缓冲液或纯水进行预清洗。也可先用0.1 M NaOH清洗，再用缓冲液或纯水进行二次清洗。
2. 离心管中的过滤膜一旦润湿后应避免变干。如果在预清洗后不是立即使用，则让液体保留在滤膜上，直到使用。
样品处理:
1. 在500 μl待提取上清样品中加入5 μl蛋白吸附抑制剂和5 μl蛋白酶抑制剂。充分混匀备用。
2. 每500 μl上清样本中加入100 μl蛋白提取液，充分混匀后，在4℃条件下振荡5-10分钟。
3. 在4℃，15000×g条件下离心20分钟。
4. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，待后续蛋白提取管离心过滤。
操作步骤：
1. 将内管插入所提供的一个微量离心管中。
2. 向内管中加入不超过500 μl的以上步骤中处理过的上清样本，并盖上盖子。
3. 将盖好盖子的蛋白提取管放入离心转子中，让盖子的连接带朝着转子的中央；用一个类似的离心管平衡。
4. 以2000-10000 x g离心约10-30分钟。
5. 离心结束后将整个蛋白提取管从离心机中取出，取出内管。
6. 为了回收过滤后的液体，将内管倒过来插在另一个干净的微量离心管中。放在离心机中，让打开的盖子朝着转子的中央；用一个类似的离心管进行平衡。以1,000 x g离心2分钟，使剩余后的样本从蛋白提取内管转移到收集管中。滤液可以保存在收集管中。
7. 将蛋白提取管清洗后用于提取其它上清蛋白样品。
清洗和保存：
1. 使用后用水冲洗干净；
2. 内管加入超纯水500 µl，5000g离心5分钟；
3. 净内管中的水，加入500 µl 0.1M NaOH，5000g离心20分钟；
4. 用0.1 M NaOH 浸泡24小时；
5. 用水冲洗干净；
6. 用无菌水浸泡2-8℃保存。
7. 外管用自来水洗净后，用超纯水冲洗干净，晾干。
常见问题分析
会因为离心时间过长而变干么？
不会，因为蛋白管有死体积，总会有溶液残留在滤管中。死体积大约10-20ul。
2. 可以重复使用蛋白管么？
可以重复使用。如果使用、清洗、保存得当，可以反复使用多次。但是多次重复使用后过滤膜有破损风险，注意使用过程中尽量避免尖锐物品戳到膜。离心力不要过大。
3. 蛋白在提取时出现了沉淀，如何改进？
蛋白如果离心过快或者过度浓缩都有可能引起蛋白沉淀。建议蛋白提取后的最终浓度不超过20 mg/ml。对于对离心速度敏感而容易沉淀的蛋白，建议的改进方法是：1）离心力降低30%-50%
2）在离心过程中取出蛋白管，用枪头反复吹吸几次
4. 提取后发现提取液中没有目的蛋白，可能的原因有哪些？
蛋白管的蛋白最低起始浓度为25ug/ml。请确保的样本的起始浓度大于这个浓度。如果问题仍然出现，请不要丢弃样本滤过液以便用于分析可能的原因：
1）如果目的样本在滤过液中，那么请排查：
a）使用的离心力是否是在限定范围内？如果使用的是rpm，请换算成相应的g离心力，具体换算方法请垂询。
b）离心机最近是否有校准过？
2）如果目的样本也不在滤过液中，那么：
a）蛋白样本起始浓度是否大于25ug/mL？
b）用来确定样本浓度的方法是什么？是否可信？
c）目的蛋白是不是沉淀了？
5. 有时候用蛋白提取离心管连水都离不下来，可能是什么原因？
如果出现这种情况，可能时过滤膜的孔被堵住。请先用0.1M NaOH清洗再离心。最后用缓冲液或纯水再次清洗后甩干。清洗后的滤膜应立即使用，如暂时不用，请保持润湿状态，避免重新干燥。
6. 说明书中推荐在室温下进行离心，考虑到蛋白的稳定性，是否可以在4℃进行离心？
可以，但是低温会增加蛋白样品的粘性，导致流速减慢，建议可将离心时间延长。
7. 是否可以用于高压灭菌？
不可以，蛋白管都是采用热封设计，不可以用高压高温灭菌。
8. 没有液流流出，为什么？
可能是溶液比较粘稠或浓度太高；
不会，因为蛋白管有死体积，总会有溶液残留在滤管中。死体积大约10-20ul。
2. 可以重复使用蛋白管么？
可以重复使用。如果使用、清洗、保存得当，可以反复使用多次。但是多次重复使用后过滤膜有破损风险，注意使用过程中尽量避免尖锐物品戳到膜。离心力不要过大。
3. 蛋白在提取时出现了沉淀，如何改进？
蛋白如果离心过快或者过度浓缩都有可能引起蛋白沉淀。建议蛋白提取后的最终浓度不超过20 mg/ml。对于对离心速度敏感而容易沉淀的蛋白，建议的改进方法是：1）离心力降低30%-50%
2）在离心过程中取出蛋白管，用枪头反复吹吸几次
4. 提取后发现提取液中没有目的蛋白，可能的原因有哪些？
蛋白管的蛋白最低起始浓度为25ug/ml。请确保的样本的起始浓度大于这个浓度。如果问题仍然出现，请不要丢弃样本滤过液以便用于分析可能的原因：
1）如果目的样本在滤过液中，那么请排查：
a）使用的离心力是否是在限定范围内？如果使用的是rpm，请换算成相应的g离心力，具体换算方法请垂询。
b）离心机最近是否有校准过？
2）如果目的样本也不在滤过液中，那么：
a）蛋白样本起始浓度是否大于25ug/mL？
b）用来确定样本浓度的方法是什么？是否可信？
c）目的蛋白是不是沉淀了？
5. 有时候用蛋白提取离心管连水都离不下来，可能是什么原因？
如果出现这种情况，可能时过滤膜的孔被堵住。请先用0.1M NaOH清洗再离心。最后用缓冲液或纯水再次清洗后甩干。清洗后的滤膜应立即使用，如暂时不用，请保持润湿状态，避免重新干燥。
6. 说明书中推荐在室温下进行离心，考虑到蛋白的稳定性，是否可以在4℃进行离心？
可以，但是低温会增加蛋白样品的粘性，导致流速减慢，建议可将离心时间延长。
7. 是否可以用于高压灭菌？
不可以，蛋白管都是采用热封设计，不可以用高压高温灭菌。
8. 没有液流流出，为什么？
可能是溶液比较粘稠或浓度太高；
-
优惠促销Promotion
-
轻松下单Order
-
在线留言Online message
-
帮助中心Help center